CREB在前列腺癌細(xì)胞DU145中的表達(dá)機(jī)制及抗癌功能分析.pdf

1、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、及它們之間的相互作用都極為重要，并受諸多因子的控制。CREB，即第二信使cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白，是核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子。CREB由341個(gè)氨基酸構(gòu)成，該蛋白質(zhì)屬于富含亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)(bZIP)超蛋白家族成員之一。CREB的二級(jí)結(jié)構(gòu)有兩個(gè)功能區(qū)構(gòu)成:C端富含堿性氨基酸，其中包含一個(gè)亮氨酸拉鏈區(qū)(Leucine zipper region)，它是一段約50個(gè)氨基酸殘基組成的序列，亮氨酸在其中是周期性出現(xiàn)的。

2、該區(qū)域與DNA的親和力強(qiáng)，能夠形成卷曲的螺旋構(gòu)象，被稱為DNA結(jié)構(gòu)域;N端是富含酸性氨基酸的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)域，該區(qū)可以細(xì)分為以下幾個(gè)結(jié)構(gòu)域，KID區(qū)（多種激酶誘導(dǎo)結(jié)構(gòu)域）、X區(qū)（拮抗KID區(qū)的功能）、A區(qū)（增強(qiáng)CREB轉(zhuǎn)錄功能）、Q3區(qū)（刺激轉(zhuǎn)錄活性的關(guān)鍵部位）、Q2區(qū)（輔助轉(zhuǎn)錄作用）和PRO區(qū)（協(xié)助發(fā)揮轉(zhuǎn)錄作用），這些區(qū)域協(xié)調(diào)配合共同對(duì)轉(zhuǎn)錄調(diào)控起作用。
　　作為核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的CREB參與細(xì)胞的各種生命活動(dòng)。已有研究發(fā)現(xiàn)CREB依賴

3、其磷酸化，對(duì)靶基因上的啟動(dòng)子調(diào)控，最終影響各種細(xì)胞周期相關(guān)蛋白如CDKs，Cyclins，CKIs的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的周期。CREB對(duì)細(xì)胞的調(diào)控還涉及到細(xì)胞凋亡。有研究表明在人體心肌細(xì)胞中，過(guò)氧化酶體能刺激受體α(PPARα)的過(guò)表達(dá)，受體α通過(guò)抑制Bcl-2誘發(fā)細(xì)胞凋亡，而上調(diào)心肌細(xì)胞中CREB的表達(dá)能夠拮抗受體α對(duì)Bcl-2的抑制作用，從而對(duì)心肌細(xì)胞的凋亡起保護(hù)作用。此外，CREB與腫瘤細(xì)胞的凋亡也密切相關(guān)，關(guān)于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株

4、(NSCLC)的研究發(fā)現(xiàn)，用RNAi抑制CREB的表達(dá)后，能夠抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株的凋亡。CREB與細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的相關(guān)性，以及與腫瘤細(xì)胞凋亡的密切關(guān)聯(lián)，揭示了CREB在癌癥發(fā)生中的重要作用，為本實(shí)驗(yàn)利用DU145細(xì)胞來(lái)研究CREB在前列腺癌中的作用提供依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立PP2A的正調(diào)控因子CREB的過(guò)表達(dá)細(xì)胞系DU145-CREB及對(duì)照組空載細(xì)胞系DU145-Neo進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)以

5、及蛋白質(zhì)印跡等實(shí)驗(yàn)，在細(xì)胞水平，蛋白水平以及組織水平探究CREB在前列腺癌細(xì)胞DU145中的調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)CREB的DU145細(xì)胞比空載的DU145細(xì)胞的增長(zhǎng)速度慢，DU145-CREB細(xì)胞系比空載DU145-Neo細(xì)胞系的遷移能力弱，且裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)注射DU145-CREB細(xì)胞系的裸鼠體內(nèi)的腫瘤比注射空載DU145-Neo細(xì)胞系的腫瘤小。之后對(duì)所取腫瘤進(jìn)行石蠟切片，發(fā)現(xiàn)注射DU145-Neo細(xì)胞所成的腫瘤組織比注射DU