兔骨髓間質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞及羅格列酮干預(yù).pdf

1、目的：探討體外培養(yǎng)的兔骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(rBMMSCs)增殖能力和分化為脂肪細(xì)胞的能力以及分化過(guò)程中過(guò)氧化物增殖激活受體γ(PPARγ)基因表達(dá)的變化和羅格列酮對(duì)脂肪細(xì)胞分化、PPARγ表達(dá)的影響。 研究方法：新西蘭大白兔3只，速眠新Ⅱ0.2ml/kg肌肉注射全身麻醉，無(wú)菌條件下骨髓穿刺針?lè)謩e抽取右側(cè)股骨骨髓2ml，采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離rBMMSCs，細(xì)胞體外接種傳代后以第6代細(xì)胞為研究對(duì)象，MTT法測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

2、。隨后細(xì)胞隨機(jī)分為兩組：1，對(duì)照組，予普通培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；2，成脂誘導(dǎo)組，予成脂培養(yǎng)基（DMEM-LG培養(yǎng)液,10％FBS,170 nM 胰島素,0.5 mM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤,0.2mM吲哚美辛,1μM地塞米松,100U/ml青霉素,100μg/ml鏈霉素）誘導(dǎo)培養(yǎng)21天。成脂誘導(dǎo)組21天后又隨機(jī)分為普通誘導(dǎo)組和羅格列酮組，前者繼續(xù)予成脂培養(yǎng)基誘導(dǎo)至第28天；后者在成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入羅格列酮2μM繼續(xù)誘導(dǎo)至第28天。誘導(dǎo)培

3、養(yǎng)后于7，14，21，28天鏡下計(jì)數(shù)各組脂肪細(xì)胞所占百分比，油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂滴，隨后異丙醇洗脫脂滴中油紅O，570nm分光光度計(jì)檢測(cè)油紅O含量OD值，評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)脂肪含量，逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）于0，7，14，21，28天檢測(cè)各組PPARγ mRNA表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：反復(fù)傳代6次后rBMMSCs仍然具有穩(wěn)定的增殖能力，所含其他雜細(xì)胞較少。成脂誘導(dǎo)組第7、14、21天，普通誘導(dǎo)組第28天及羅格列酮組第28天分化的脂

4、肪細(xì)胞比例分別為23.1±4.1％，57.4±3.0％、70.3±3.6％、68.3±3.9％和84.5±4.2％，組間比較發(fā)現(xiàn)成脂誘導(dǎo)21天內(nèi)隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)分化的脂肪細(xì)胞逐漸增多，羅格列酮組第28天與普通誘導(dǎo)組第28天分化的脂肪細(xì)胞含量比較，差異有顯著性。油紅O染色脂滴呈橙色。570nm分光光度計(jì)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)成脂誘導(dǎo)組第7、14、21天，普通誘導(dǎo)組第28天及羅格列酮組第28天OD值分別為0.07±0.01、0.21±0.02、0.31±0

5、.06、0.29±0.04和0.46±0.05，組間比較發(fā)現(xiàn)成脂誘導(dǎo)21天內(nèi)隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)脂肪含量逐漸增多，羅格列酮組第28天與普通誘導(dǎo)組第28天脂肪含量比較，差異有顯著性。RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PPARγ/GAPDH比值在第0、7、14、21天、普通誘導(dǎo)組第28天及羅格列酮組第28天分別為0.16±0.008、0.28±0.02、0.42±0.04、0.60±0.09、0.58±0.09、0.87±0.08，組間比較發(fā)現(xiàn)成脂誘導(dǎo)21天內(nèi)