兔骨髓間質干細胞誘導分化為脂肪細胞及羅格列酮干預.pdf

1、目的：探討體外培養(yǎng)的兔骨髓間質干細胞(rBMMSCs)增殖能力和分化為脂肪細胞的能力以及分化過程中過氧化物增殖激活受體γ(PPARγ)基因表達的變化和羅格列酮對脂肪細胞分化、PPARγ表達的影響。 研究方法：新西蘭大白兔3只，速眠新Ⅱ0.2ml/kg肌肉注射全身麻醉，無菌條件下骨髓穿刺針分別抽取右側股骨骨髓2ml，采用密度梯度離心法結合貼壁篩選法分離rBMMSCs，細胞體外接種傳代后以第6代細胞為研究對象，MTT法測細胞生長曲線

2、。隨后細胞隨機分為兩組：1，對照組，予普通培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；2，成脂誘導組，予成脂培養(yǎng)基（DMEM-LG培養(yǎng)液,10％FBS,170 nM 胰島素,0.5 mM 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤,0.2mM吲哚美辛,1μM地塞米松,100U/ml青霉素,100μg/ml鏈霉素）誘導培養(yǎng)21天。成脂誘導組21天后又隨機分為普通誘導組和羅格列酮組，前者繼續(xù)予成脂培養(yǎng)基誘導至第28天；后者在成脂誘導培養(yǎng)基中加入羅格列酮2μM繼續(xù)誘導至第28天。誘導培

3、養(yǎng)后于7，14，21，28天鏡下計數(shù)各組脂肪細胞所占百分比，油紅O染色檢測細胞內脂滴，隨后異丙醇洗脫脂滴中油紅O，570nm分光光度計檢測油紅O含量OD值，評價細胞內脂肪含量，逆轉錄多聚酶鏈反應（RT-PCR）于0，7，14，21，28天檢測各組PPARγ mRNA表達。 實驗結果：反復傳代6次后rBMMSCs仍然具有穩(wěn)定的增殖能力，所含其他雜細胞較少。成脂誘導組第7、14、21天，普通誘導組第28天及羅格列酮組第28天分化的脂

4、肪細胞比例分別為23.1±4.1％，57.4±3.0％、70.3±3.6％、68.3±3.9％和84.5±4.2％，組間比較發(fā)現(xiàn)成脂誘導21天內隨誘導時間延長分化的脂肪細胞逐漸增多，羅格列酮組第28天與普通誘導組第28天分化的脂肪細胞含量比較，差異有顯著性。油紅O染色脂滴呈橙色。570nm分光光度計檢測發(fā)現(xiàn)成脂誘導組第7、14、21天，普通誘導組第28天及羅格列酮組第28天OD值分別為0.07±0.01、0.21±0.02、0.31±0

5、.06、0.29±0.04和0.46±0.05，組間比較發(fā)現(xiàn)成脂誘導21天內隨誘導時間延長脂肪含量逐漸增多，羅格列酮組第28天與普通誘導組第28天脂肪含量比較，差異有顯著性。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)PPARγ/GAPDH比值在第0、7、14、21天、普通誘導組第28天及羅格列酮組第28天分別為0.16±0.008、0.28±0.02、0.42±0.04、0.60±0.09、0.58±0.09、0.87±0.08，組間比較發(fā)現(xiàn)成脂誘導21天內