茶黃素對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的影響.pdf

1、目的：茶黃素是紅茶中的主要成分，具有調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、抗腫瘤、抗心腦血管疾病等多種藥理活性。以往茶黃素對(duì)人體內(nèi)脂肪代謝的影響多數(shù)屬于宏觀分析，實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞水平上探討茶黃素對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)于2007-05/09在安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室完成。①動(dòng)物：清潔級(jí)4～8周齡家兔10只，由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處置符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。②實(shí)驗(yàn)方法：兔全身肝素化后麻醉狀態(tài)下處

2、死，取雙側(cè)股骨脛骨和肱骨，去除軟組織，切除包括骺板在內(nèi)的兩側(cè)骺端，采用全骨髓法分離培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，按2×108L-1密度接種，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至80％～90％融合時(shí)消化傳代。取傳至3代的細(xì)胞按l×105/cm2密度接種，加入含重組人胰島素1 0mg/L、地塞米松10-6mol/L，0.5mmol/LIBMX的DMEM成脂誘導(dǎo)液培養(yǎng)2周。設(shè)立3組：脂肪對(duì)照組單純放入成脂誘導(dǎo)液1ml；茶黃素組向多少1ml成脂誘導(dǎo)液中加入500μg/L茶黃素；

3、空白對(duì)照組僅加入等量普通DMEM培養(yǎng)液。③實(shí)驗(yàn)評(píng)估：取第2代培養(yǎng)細(xì)胞繪制生長(zhǎng)曲線；油紅O染色對(duì)誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞進(jìn)行鑒定，計(jì)算脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。 　　結(jié)果：①細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有旺盛的增殖能力，培養(yǎng)1d為細(xì)胞適應(yīng)期，3d后為對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期，8d時(shí)進(jìn)入平臺(tái)期，之后細(xì)胞增殖迅速減慢，細(xì)胞數(shù)下降。②脂肪細(xì)胞油紅O染色鑒定結(jié)果：脂肪細(xì)胞中的脂滴被染成橙紅色，胞核為藍(lán)色。脂肪對(duì)照組多數(shù)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為脂肪細(xì)胞，轉(zhuǎn)化率為(64.8 4.8)