茶黃素與TGF-β3對兔骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞增殖和誘導分化地影響.pdf

1、目的:軟骨損傷在臨床上非常多見,但修復非常困難,組織工程的發(fā)展使軟骨修復的研究得到長足的發(fā)展,間充質(zhì)干細胞被認為是一種理想的種子細胞。轉(zhuǎn)化生長因子β3可以誘導軟骨的代謝和增殖,而茶黃素也有促進軟骨代謝和增殖的作用,本實驗探討在茶黃素和轉(zhuǎn)化生長因子β3的聯(lián)合作用下對骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞誘導分化和增殖的影響。
　　方法:本實驗于2009-09/12在安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院中心實驗室完成。
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2、潔級新西蘭大白兔15只,雌雄不拘,由安徽醫(yī)科大學動物試驗中心提供,實驗過程中對家兔處置符合動物倫理學標準。⑵實驗方法:全身肝素麻醉狀態(tài)下處死動物,取雙側(cè)肱骨和股骨,剔去附麗軟組織,切除兩側(cè)骺端(包括骺板),全骨髓法分離及培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞,按6×104/L的細胞密度接種,當細胞生長至90％左右融合時消化傳代。取第3代細胞按1×104/ml地密度接種,置入含地塞米松10-8mmol/L、轉(zhuǎn)化生長因子β310μg/L和重組人胰島素15mg

3、/L的DMBM成軟骨誘導液培養(yǎng)二周,取第三代骨髓間充質(zhì)干細胞分為3組:對照組:完全培養(yǎng)基加地塞米松10-8mmol/L、維生素C10mmol/L。轉(zhuǎn)化生長因子組:完全培養(yǎng)基加地塞米松10-8mmol/L、維生素C10mmol/L、轉(zhuǎn)化生長因子β310μg/L。茶黃素組:完全培養(yǎng)基加地塞米松10-8mmol/L、維生素C10mmol/L、轉(zhuǎn)化生長因子β310ng/mL、茶黃素30mg/L。⑶評估:在倒置顯微鏡下觀察細胞的生長狀況和形態(tài)變化

4、,用甲苯胺藍染色和阿利新藍比色法測定各板每孔中葡萄糖氨基聚糖含量,免疫檢測儀測定3組的吸光度值鑒別II型膠原。
　　結(jié)果:骨髓基質(zhì)干細胞增值能力旺盛,培養(yǎng)24小時為細胞適應期,72小時為對數(shù)增長期,一周后進入平臺期,以后速度減慢,細胞數(shù)減少;骨髓中分離獲得地骨髓間充質(zhì)干細胞在體外增殖旺盛,細胞經(jīng)茶黃素和轉(zhuǎn)化生長因子β3誘導后生長明顯減緩。加入誘導液誘導二周后,誘導組與對照組均有顯著的差異性(P<0.05),誘導組之間同樣具有差異性