體外誘導大鼠骨髓基質(zhì)細胞向神經(jīng)細胞樣細胞分化.pdf

1、目的：研究大鼠骨髓基質(zhì)細胞(BMSCs)離體分離和培養(yǎng)方法,探討堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、表皮生長因子(EGF)和全反式維甲酸(RA)的聯(lián)合誘導劑與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)在體外條件下誘導BMSCs向神經(jīng)細胞樣細胞分化的作用。 方法：成年SD大鼠,雌雄不拘,體重100-120g。在細胞培養(yǎng)室內(nèi)超凈工作臺上取材。用股骨、脛骨灌洗法采集成年大鼠骨髓細胞,密度梯度離心法分離出骨髓基質(zhì)細胞。并在體外進行培養(yǎng)、擴增、消化

2、、傳代,倒置顯微鏡觀測細胞形態(tài),傳至第3代時,進行誘導分化。分為3組:A組:bFGF+EGF+RA聯(lián)合誘導；B組:BMP-7進行誘導；C組為空白對照組,不加誘導劑繼續(xù)培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下每日觀察、記錄BMSCs的增殖、誘導分化情況,并應用免疫組化技術對細胞進行神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)檢測。 結果：用含20％胎牛血清的L-DMEM培養(yǎng)BMSCs,原代細胞貼壁生長,細胞形態(tài)均-,為紡錘形,有克隆形成。傳代培養(yǎng)時,形態(tài)變?yōu)槌衫w維

3、細胞樣,生長特征呈"S"形曲線,有較強的增殖能力。誘導分化可見:A組誘導7天后有部分細胞具備神經(jīng)元樣細胞形態(tài),胞體呈錐形或圓形,有較長單極或多極的突起,有NSE陽性細胞表達。而B組,C組細胞仍為典型的成纖維細胞形態(tài),無NSE陽性細胞。 結論：骨髓基質(zhì)細胞具有較強的自我更新及多向分化能力,在適宜的誘導分化條件下,可誘導分化出神經(jīng)細胞。bFGF、EGF和RA可以聯(lián)合誘導BMSCs向神經(jīng)細胞樣細胞分化,并可調(diào)控神經(jīng)元分化,而BMP-7