體外誘導大鼠骨髓干細胞分化為胰島素分泌細胞.pdf

1、目的：糖尿病是一種嚴重危害人們健康的慢性疾病。胰島細胞移植可能是不依賴胰島素治愈糖尿病的最佳方法。但由于移植材料匱乏，這種治療方法的推廣受到了限制。目前研究表明多種來源干細胞可以通過體外誘導分化為胰島素分泌細胞，這為胰島細胞移植提供了新的來源。因骨髓干細胞具有多種分化潛能、取材容易、可以避免免疫排斥反應等優(yōu)點，使其成為誘導分化胰島細胞的最佳候選千細胞。有研究顯示骨髓干細胞在體外可以誘導分化為胰島素分泌細胞。各種誘導方法雖然不盡相同，但總

2、體上都比較繁瑣，而且大多都應用細胞因子。這大大地限制了骨髓干細胞作為胰島細胞移植的來源在臨床上的廣泛應用。本實驗嘗試在體外通過簡單的非細胞因子方法誘導大鼠骨髓干細胞，使其分化為胰島素分泌細胞，并應用一系列方法對誘導的細胞進行檢測，目的在于探索一種不應用任何細胞因子，簡單易行的誘導方法，從而為骨髓干細胞作為胰島細胞移植的來源在臨床上實際應用提供進一步的理論依據(jù)及新思路。 方法：1、制備鼠尾膠原及鋪鼠尾膠原的玻片及六孔板。2、分離大

3、鼠骨髓細胞。3、將分離的骨髓細胞分別設為DMSO及高糖環(huán)境培養(yǎng)的誘導組和低糖環(huán)境培養(yǎng)的對照組。4、通過倒置顯微鏡觀察誘導組和對照組細胞形態(tài)的改變。5、通過雙硫腙染色的方法檢測誘導組及對照組細胞胰島素的合成。6、通過免疫組化的方法檢測誘導組及對照組細胞在蛋白質水平上胰島素的表達。7、通過RT-PCR的方法檢測誘導組及對照組細胞在mRNA水平上胰島素的表達。8、通過ELISA的方法檢測誘導組及對照組細胞分泌到細胞外的胰島素含量。 結

4、果：1、誘導組形成的細胞團在形態(tài)上與胰島十分相似，與對照組形成的細胞團明顯不同。2、用雙硫腙對誘導組和對照組的細胞團進行染色，誘導組的細胞團呈現(xiàn)猩紅色，表明細胞中有鋅離子，提示有胰島素的合成，而對照組不顯色。3、免疫組化染色結果顯示誘導組除團樣細胞胞漿中有胰島素外，圓形、橢圓形和部分梭形的分散的單個細胞中也含有胰島素。對照組的細胞中無胰島素存在。4、RT-PCR結果顯示在mRNA水平上誘導組細胞表達Ins1和Ins2，而對照組不表達。5