骨髓與脂肪間質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)向分化能力比較研究.pdf

1、目的：神經(jīng)系統(tǒng)疾病如脊髓損傷、退行性病、多發(fā)硬化、運(yùn)動神經(jīng)元病等，主要原因是神經(jīng)細(xì)胞的壞死、功能的缺失。干細(xì)胞(stem cells)是一類具有無限自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞，在一定條件下，可分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞，有望作為神經(jīng)系統(tǒng)疾病細(xì)胞移植的種子細(xì)胞，但是干細(xì)胞種類繁多，據(jù)其發(fā)生學(xué)來源的不同可分為胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells，ESCs)和成體干細(xì)胞(adult stem cells，ASCs)，

2、其中ASCs是指存在于已分化組織的未分化細(xì)胞。ASCs較ESCs的優(yōu)點(diǎn)是取材相對方便，不存在倫理學(xué)問題。目前研究較多的成體干細(xì)胞主要是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，它取材方便，易于分離純化，神經(jīng)向分化能力的研究也比較多，已應(yīng)用于前期臨床研究試驗(yàn)，而脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells，ADSCs)作為近年來新

3、發(fā)現(xiàn)的種子細(xì)胞，神經(jīng)向分化能力的研究還相對較少，但它具有BMSCs所不具備的優(yōu)點(diǎn)，如：獲取更為方便，對人體創(chuàng)傷小，很少受血液及免疫系統(tǒng)的影響等。本實(shí)驗(yàn)旨在比較人類BMSCs與ADSCs的神經(jīng)向分化能力，為干細(xì)胞移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病篩選理想種子細(xì)胞。
　　 方法：1）采用Percoll分離法在體外培養(yǎng)及擴(kuò)增BMSCs，利用胰酶消化的方法獲取ADSCs。通過表面抗原檢測的方法進(jìn)行鑒定。2）采用多種生長因子聯(lián)合誘導(dǎo)方案誘導(dǎo)ADSCs、

4、BMSCs神經(jīng)向分化，即先用濃度為10ng/ml的bFGF預(yù)誘導(dǎo)24h，再加入20ng/ml的bFGF、20ng/ml的EGF、20ng/ml的BDNF，分別于24h、3d、7d、10d、14d時進(jìn)行免疫熒光檢測Nestin、β-Ⅲ-Tubulin、NSE的表達(dá)，尼氏熒光染色檢測尼氏小體表達(dá)，觀察細(xì)胞形態(tài)變化。3）統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞的比率，卡方檢驗(yàn)分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果。
　　 結(jié)果：1．采用percoll密度梯度離心法成功分離出人骨髓間充質(zhì)干

5、細(xì)胞，細(xì)胞表型鑒定為CD90陽性，CD106陽性，CD34陰性。2．通過對比ADSCs和BMSCs的生長曲線發(fā)現(xiàn)，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞較骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力。3．利用生長因子聯(lián)合誘導(dǎo)的方式誘導(dǎo)BMSCs和ADSCs神經(jīng)向分化，誘導(dǎo)后，BMSCs和ADSCs細(xì)胞形態(tài)都發(fā)生了改變，胞體變圓并伸出細(xì)長突起，對于分化細(xì)胞的神經(jīng)細(xì)胞特異標(biāo)記的鑒定也具有相同的趨勢：誘導(dǎo)中期Nestin、β-Ⅲ-tublin顯著增多，晚期稍降，而NSE和N