尼美舒利對大鼠HSC-T6細(xì)胞Rassf1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討Rassf1基因在HSC-T6細(xì)胞中的表達(dá)及尼美舒利對HSC-T6細(xì)胞Rassf1基因表達(dá)的影響。
　　方法:
　　1.取對數(shù)生長期HSC-T6細(xì)胞，接種到含有10％小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)基中，放入37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6-8小時后，分別加入200μmol/L、400μmol/L尼美舒利及單純的RPMI-1640培養(yǎng)液。每組設(shè)3個平行復(fù)孔。
　　2.培養(yǎng)第24h、48h、72h后,MTT比色法

2、檢測細(xì)胞活力；
　　3.培養(yǎng)第48h采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測HSC-T6 COX-2的表達(dá);
　　4. AnnexinV-APC/7AAD的流式細(xì)胞術(shù)檢測HSC-T6的凋亡；
　　5.采用實(shí)時熒光定量PCR檢測Rassf1mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測結(jié)果顯示，加藥后48h三組細(xì)胞環(huán)氧合酶-2表達(dá)陽性率分別為：70.13±2.40％、40.13±4.40％、30.36±5.81%（F

3、=72.982，P＜0.01）；
　　2.MTT結(jié)果顯示，400μmol/L尼美舒利處理48h后，HSC-T6細(xì)胞的生長出現(xiàn)明顯的抑制作用；
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，加藥后48h，200μmol/L、400μmol/L尼美舒利處理組HSC-T6細(xì)胞凋亡率分別是10.23±1.34,25.23±7.7％,65.87±2.89％，與空白對照組比較，兩組差異有顯著性；
　　4. RT-qPCR方法檢測各實(shí)驗(yàn)組Rass