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文檔簡介
1、目的:以轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肝星狀細胞株(HSC-T6)為實驗對象,了解丹參素、黃芪對HSC-T6的TGF-β/TβR/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用,探討丹參素、黃芪抗肝纖維化的機制。
方法:丹參素、黃芪作用傳代培養(yǎng)的大鼠肝星狀細胞HSC-T6。MTT法檢測藥物對HSC-T6生長增殖的影響,了解藥物對TGF-β1刺激的HSC-T6增殖影響;免疫細胞化學(xué)染色法觀察HSC-T6細胞株α-SMA的表達,以及H
2、SC-T6細胞株Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成;ELISA法觀察Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌;HSC-T6細胞膜上的TβRⅠ、Ⅱ的表達用間接免疫熒光及Western blot法觀察;RT-PCR法分析丹參素、黃芪和TGF-β1共同作用HSC-T6后,Smad2、3、7mRNA的表達變化。
結(jié)果:(1)丹參素和黃芪在0.0125mg/ml~0.2mg/ml時,對HSC-T6生長增殖有抑制作用,其強度隨濃度的增加而增強(P<0.01);丹參素、黃芪對
3、TGF-β1刺激HSC-T6引起的增殖有明顯的抑制作用,呈劑量依賴性(P<0.01);丹參素、黃芪最佳濃度為0.0125mg/ml~0.05mg/ml。(2)丹參素、黃芪能減少TGF-β1誘導(dǎo)的α-SMA表達,下調(diào)Ⅰ、Ⅲ型膠原合成和分泌(P<0.01)。(3)丹參素、黃芪能下調(diào)HSC-T6細胞膜上TβRⅠ、Ⅱ的表達,隨濃度的增高增強(P<0.01),丹參素對TβRⅠ的抑制作用強于黃芪(P<0.01)。(4)TGF-β1可促進HSC-T6
4、內(nèi)Smad2、3、7mRNA的表達;丹參素、黃芪下調(diào)HSC-T6內(nèi)Smad2、3mRNA的表達(P<0.01),并上調(diào)Smad7 mRNA的表達(P<0.01)。
結(jié)論:體外細胞試驗研究表明,丹參素、黃芪能下調(diào)HSC-T6細胞膜上TβRⅠ、Ⅱ的表達;下調(diào)Smad2、3mRNA的表達,上調(diào)Smad7mRNA表達;抑制HSC-T6活化增殖及TGF-β1促進HSC-T6活化的作用,抑制α-SMA表達;減少Ⅰ、Ⅲ型膠原合成和分泌。
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