二烯丙基二硫誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6凋亡的作用及機制.pdf

1、目的：觀察二烯丙基二硫（DADS）在體外對大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）凋亡的影響，并探討DADS是否通過抑制bcl-2、促進(jìn)bax的表達(dá)來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而起抗肝纖維化作用。
　　方法：1.分別用不同濃度的DADS（0、50、100、200、400、800μmol/L）處理HSC-T6細(xì)胞不同時間（24、48、72h）后，CCK-8法檢測 DADS對細(xì)胞的增殖抑制作用，得出最適濃度范圍及作用時間，并根據(jù)此結(jié)果調(diào)整后續(xù)實驗的藥物濃

2、度及作用時間；2.光學(xué)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)后，Hoechst33342染色法觀察細(xì)胞核凋亡形態(tài)學(xué)變化；3.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期（PI單染法）和細(xì)胞凋亡率（Annexin-FITC/PI雙染法）；4.分別用Western Blot及免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測不同濃度DADS對Bcl-2、Bax表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1.DADS對HSC-T6體外增殖抑制作用明顯，呈濃度依賴性，并得出藥物作用48h后效果最佳，其IC50為292μmol/

3、L，調(diào)整后續(xù)實驗藥物濃度為0、150、300、600μmol/L；2.DADS能引起細(xì)胞學(xué)形態(tài)顯著變化。光學(xué)倒置顯微鏡下可見藥物組細(xì)胞貼壁不均勻，縮小呈類圓形，胞核固縮，部分細(xì)胞碎裂成片，且隨著濃度增加，形態(tài)改變更明顯；3.DADS能阻滯細(xì)胞周期于S期：隨藥物濃度的增加，G0/G1期、G2/M期細(xì)胞比例減少，而S期細(xì)胞比例明顯增加，提示細(xì)胞周期阻滯于S期；4.DADS能促進(jìn)細(xì)胞凋亡：①Hoechst33342染色后熒光顯微鏡下可見胞核呈

4、凋亡形態(tài)學(xué)改變，表現(xiàn)為核固縮呈強藍(lán)色熒光致密團(tuán)塊、染色質(zhì)濃縮邊聚向核膜靠攏形成半月形、部分細(xì)胞發(fā)生核碎裂、凋亡小體形成等；②流式細(xì)胞術(shù)檢測到細(xì)胞凋亡率與 DADS作用濃度呈正相關(guān)；5.免疫細(xì)胞化學(xué)法與Western Blot法均證實藥物組Bcl-2較對照組表達(dá)減弱，而Bax表達(dá)增強。
　　結(jié)論：1.DADS能顯著抑制HSC-T6體外增殖；2.DADS可明顯誘導(dǎo)HSC-T6凋亡，其機制可能與減弱bcl-2、增強bax的蛋白表達(dá)相關(guān)。