瘦素促進(jìn)大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)的增殖及SB-431542干預(yù)的研究.pdf

1、目的:1.觀察瘦素經(jīng)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)途徑促進(jìn) SD大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)的增殖。2.觀察TGF-β1受體特異性拮抗劑SB-431542抑制外源性瘦素對(duì)肝星狀細(xì)胞的增殖。
　　方法:試驗(yàn)分為對(duì)照組、不同濃度的瘦素(50、100、和300ng/ml)組及不同濃度的SB-431542(0.5、1.0、10.0umol/ml)作用于瘦素100ng/ml誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞組,分別作用于肝星狀細(xì)胞不同時(shí)間(24h、

2、48h、72h)組,應(yīng)用 MTT法檢測(cè)瘦素對(duì)肝星狀細(xì)胞的增殖作用;采用 RT-PCR法檢測(cè)肝纖維化指標(biāo)aI型前膠原a1(ColIa1)mRNA和肝星狀細(xì)胞活化指標(biāo)a-平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)mRNA的變化;用間接免疫熒光來(lái)觀察aI型前膠原a1(ColIa1)蛋白、a-平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)蛋白的表達(dá);用放射免疫來(lái)測(cè)定肝纖維化指標(biāo)Ⅲ型膠原(PCⅢ),層粘連蛋白(LN)的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.MTT結(jié)果顯示瘦素可以促進(jìn)肝星狀

3、細(xì)胞增殖,并存在劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系,以瘦素100ng/ml,48h時(shí)的最明顯,增殖率為81.3％;2.瘦素組與對(duì)照組相比,a1(ColIa1)mRNA、a-SMAmRNA、a1(ColIa1)蛋白、a-SMA蛋白、PCⅢ、LN的表達(dá)呈遞增趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),并存在劑量、時(shí)間依賴(lài)性,以瘦素100ng/ml,48h時(shí)最明顯;3.不同濃度SB-431542干預(yù)瘦素誘導(dǎo) HSC-T6組與瘦素100ng/ml組相比, a1(C

4、olIa1)mRNA、a-SMAmRNA、a1(ColIa1)蛋白、a-SMA蛋白、PCⅢ、LN的表達(dá)隨濃度的增加,時(shí)間的延長(zhǎng)呈遞減的趨勢(shì),各指標(biāo)之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),并以10.0umol/ml,48小時(shí)為最明顯。
　　結(jié)論:1、瘦素可以促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的增殖,有劑量、時(shí)間依賴(lài)性。2、SB-431542可明顯抑制外源性瘦素對(duì)肝星狀細(xì)胞的增殖作用,有劑量、時(shí)間依賴(lài)性,故運(yùn)用 SB-431542可能對(duì)防治肝纖維化有效,