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文檔簡介
1、目的:
研究COX-2對HSC-T6細胞中Acsl家族相關基因表達的影響,明確COX-2調節(jié)HSC-T6細胞脂類代謝的作用環(huán)節(jié)。
方法:
1、實驗分組:HSC-T6細胞組(空白組),pYr-1.1-COX-2 shRNA組(COX-2 shRNA組);pYr-1.1-NC組(空載體組)。
2、將構建好的pYr-1.1-COX-2 shRNA及pYr-1.1-NC分別轉染至HSC-T6細胞中,并于轉
2、染后48小時用熒光倒置顯微鏡觀察轉染效率。
3、利用Real-time PCR技術檢測轉染后各組細胞內(nèi)COX-2、Acsl1、Acsl3、Acsl4、Acsl5、Acsl6基因表達情況。
4、根據(jù)Real-time PCR技術檢測結果,選取Acsl家族中有意義的基因,再利用Western Blot技術檢測HSC-T6細胞中Acsl家族相關基因的蛋白表達。
結果:
1、轉染HSC-T6細胞48小時后
3、,在熒光倒置顯微鏡下可見細胞質中分布著綠色熒光,且轉染效率達75%以上。
2、HSC-T6細胞不同組別中COX-2 mRNA表達情況:COX-2 mRNA在COX-2 shRNA組中表達低于空白組和空載體組,統(tǒng)計學處理有顯著意義(p<0.05)。
3、HSC-T6細胞不同組別中Acsl家族相關基因 mRNA表達情況:COX-2 shRNA組中Acsl6 mRNA表達較空白組及空載體組明顯增加,統(tǒng)計學處理有顯著意義(p
4、<0.05),但Acsl1、Acsl3、Acsl4、Acsl5mRNA表達變化不大,沒有統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
4、HSC-T6細胞不同組別中Acsl6蛋白質表達情況:COX-2 shRNA組中Acsl6蛋白質表達較空白組及空載體組明顯增加,統(tǒng)計學處理有顯著意義(p<0.05)。
結論:
1、靶向COX-2的shRNA可以明顯沉默HSC-T6細胞中COX-2的表達。
2、在大鼠HSC-T6細
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