基因芯片技術研究莪術不同成分對HSC-T6細胞基因表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究制備含有50個肝纖維化相關基因的寡核苷酸芯片,以HSC-T6為模式細胞系,開展莪術4種不同成分(莪術油、莪術醇、β-欖香烯、姜黃素)對HSC-T6細胞基因表達的影響的研究,從分子水平探索中藥莪術的抗肝纖維化作用機理.方法:從基因庫中查詢TGFβ1、PDGF、IL-6、IL-10、HGF、ICAM-1、MIP-2、TGF β R Ⅰ、TGF β R Ⅱ、PDGFR α、PDGFR β、TNF α R1、MMP2、TIMP-1等5

2、0種肝纖維化相關基因(包括看家基因)的mRNA序列,用寡核苷酸探針設計軟件設計探針,在PEg909DNA合成儀上合成寡核苷酸,用Genemachines公司的OGR-04點樣儀及醛基化玻片進行點片,制備成基因芯片.以不同濃度含藥(秋水仙堿、莪術油、莪術醇、β-欖香烯、姜黃素)培養(yǎng)液培養(yǎng)HSC-T6細胞.根據(jù)細胞毒性實驗,確定細胞存活率在50％以上的藥物濃度作為實驗所用濃度,每組設空白對照,分別按1h、6h、12h、24h 4個時間段收集

3、細胞.以Trizol試劑按說明書推薦的操作步驟提取細胞總RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄熒光標記、雜交和洗滌,用掃描儀Genepix 4000B掃描芯片,ImaGene 4.2軟件進行數(shù)據(jù)分析和歸一化處理,使用看家基因和陽性對照對Cy3和Cy5掃描結果進行校正,分析莪術不同成分(莪術油、莪術醇、β-欖香烯、姜黃素)對HSC-T6細胞基因表達的差異.結果:秋水仙堿6.25μg/ml作用HSC-T6細胞12小時,可使基因TIMP-1表達下調(diào)2.2倍;莪術油

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