HPLC和垂直板非連續(xù)SDS-PAGE檢測(cè)尿中微量蛋白方法的建立與評(píng)價(jià).pdf

1、目的:
　　 1.建立一種快速檢測(cè)尿中微量白蛋白的高效液相色譜檢測(cè)方法。
　　 2.研究垂直板非連續(xù)SDS-PAGE分析尿蛋白的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法:
　　 1.高效液相色譜法:采用新的流動(dòng)相建立分子篩-高效液相色譜法，測(cè)定人血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液和尿液白蛋白，對(duì)該法進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)并分析56例糖尿病患者的尿液標(biāo)本。
　　 2.垂直板非連續(xù)SDS-PAGE:用垂直板非連續(xù)SDS-PAGE分析150例

2、患者（糖尿病患者90例，其他疾病患者60例）尿蛋白，并和尿蛋白半定量及尿蛋白(24小時(shí)U-Pr)、尿微量白蛋白(MA)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)結(jié)果進(jìn)行分析比較。
　　 結(jié)果:
　　 1.高效液相色譜法:在流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)205nm時(shí)，白蛋白的出峰時(shí)間1.7min。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=1.1872X+21.286，相關(guān)系數(shù)R2=0.9984。線性范圍為(2.

3、5～2000) mg/L，線性回歸方程為:Y=1.191X+21.134，相關(guān)系數(shù)R2=0.9969。檢測(cè)低限為2 mg/L。批內(nèi)CV分別為3.98％(20 mg/L)、3.55％(200 mg/L)、4.65％(2000 mg/L)，批間CV分別為4.05％(20 mg/L)、3.60％(200 mg/L)、4.74％(2000 mg/L)?；厥章史謩e為95.3％(100 mg/L)、98.1％(500 mg/L)、97.2％(150

4、0 mg/L)。4 g/L維生素C、40 g/L尿素、4g/L肌酐、40 g/L葡萄糖、20g/L氯化鈉、100 U/ml青霉素鈉對(duì)高效液相色譜法無(wú)干擾。Hb、膽紅素、IgG有干擾，干擾率分別為Hb:68.2％(143.75 mg/L)、77.5％(287.50 mg/L)、92.1％(575.00 mg/L);膽紅素:12.9％(31.25 mg/L)、16.8％(62.50 mg/L)、20.1％(125.0 mg/L);IgG:2

5、.16％(100 mg/L)、14.7％(150 mg/L)、18.5％(200 mg/L)。
　　 2.垂直板非連續(xù)SDS-PAGE:根據(jù)電泳圖譜可以分為生理性、腎小管性、腎小球性及混合性蛋白尿;與U-Pr、MA、NAG、β2-MG相比，SDS-PAGE的靈敏度相對(duì)較高。
　　 結(jié)論:
　　 1.本研究建立了一種快速檢測(cè)尿中微量白蛋白的高效液相色譜檢測(cè)方法。該法檢測(cè)快速，靈敏度高，能檢出更多的微量白蛋白。