用SDS-PAGE和密度掃描定量檢測小麥單籽粒高、低分子量麥谷蛋白亞基.pdf

1、1.本研究檢測了高分子量麥谷蛋白亞基(HMW-GS)和低分子量麥谷蛋白亞基(LMW-GS)的提取量隨溫度條件和提取時間的變化情況。在高溫(90和65℃)時，HMW-GS和LMW-GS的提取量都很快達到最大(分別為5min和30min)，延長提取時間只能使提取量降低。在較低的溫度條件(-20、4、0、15、18、23、35或50℃)時，提取量的變化復雜：在18h內(nèi)，HMW-GS提取量隨提取時間的延長而增加，并且溫度越高提取量越多，但是當提

2、取時間達到7天時，最大提取量在-20℃，依次為0℃和4℃，而在18、23、35和50℃時，HMW-GS提取量降得如此之多以致于不能用Coomassie Brilliant Blue R250檢測到它們。與HMW-GS相似，27h內(nèi)在較低溫時LMW-GS的提取量隨時間的增加而增多，但不隨溫度的增加(從-20到35℃)而增多(它們的提取量相似)，較低溫度提取條件都優(yōu)于高溫(90和65℃)提取條件。當提取時間為7天時23℃是LMW-GS的最佳

3、的提取溫度。多次把樣品移人-70℃也有利于HMW-GS和IMW-GS的提取。 2.根據(jù)以上谷蛋白亞基提取特征，本研究設(shè)計了從小麥(Triticum aeativurn L．)全麥粉中一次性同時完全提取HMW-GS和LMW-GS方法，這個方法綜合利用了90、23和-70℃的溫度條件和48h的較長時間。本研究優(yōu)化了通過SDS-PAGE分離HMW和LMW麥谷蛋白亞基的過程，同時也優(yōu)化了提取單體蛋白的溫度條件和提取時間(以取得最大的谷蛋

4、白亞基的提取量和純度)。 3.本研究用一種單體蛋白作為定量標準來定量亞基(單位μg)。這種方法比其他單獨定量HMW-GS或LMW-GS的方法有一些重要優(yōu)勢。首先，能夠得到HMW-GS和/或LMW-GS相對于全部谷蛋白或全麥粉的相對含量。其次，能夠得到凝膠上樣品和小麥單籽粒中單個HMW或LMW亞基的絕對含量，并且這種數(shù)值可以按高低排序。 4.用以上方法，檢測了180個小麥品種的各個麥谷蛋白亞基的質(zhì)量。根據(jù)亞基分子量的范圍，