小麥低分子量麥谷蛋白基因XYGluD3-LMWGS1的原核表達(dá)和功能驗證.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、  小麥?zhǔn)俏覈闹饕Z食作物之一。研究表明,低分子量麥谷蛋白亞基與面粉的加工品質(zhì)密切相關(guān),它與高分子量麥谷蛋白亞基(HMW-GS)共同決定著面筋強度。高、低分子量麥谷蛋白亞基通過分子間二硫鍵形成麥谷蛋白大聚合體(GMP);谷蛋白大聚合體的含量、組成和粒度分布影響面團(tuán)的特性。麥谷蛋白亞基的類型和數(shù)量決定了大聚合體的大小和數(shù)量。因此,可以通過選擇優(yōu)質(zhì)麥谷蛋白亞基,增加優(yōu)質(zhì)亞基基因的表達(dá)量,提高大聚合體的含量、改變大聚合體的組成來改良面團(tuán)的加

2、工特性?! ∫呀?jīng)登錄的XYGluD3-LMWGS1(登錄號為AY263369)是迄今為止首次發(fā)現(xiàn)的編碼含有9個Cys殘基的小麥LMW-GS基因,據(jù)特征分析推測該基因可能屬于優(yōu)質(zhì)基因。為了解其功能,本實驗對該基因進(jìn)行了原核表達(dá)以及摻粉品質(zhì)特性研究,主要取得以下結(jié)果:  1.構(gòu)建了XYGluD3-LMWGS1基因的原核表達(dá)載體pET32-XYGluD3-LMWGS,實現(xiàn)了目的基因在大腸桿菌Rosetta(DE3)-plysS菌株中大量表

3、達(dá),誘導(dǎo)表達(dá)的條件是:37℃,1.0mMIPTG,誘導(dǎo)表達(dá)6hr,表達(dá)蛋白的分子量約34KD;經(jīng)氨基酸測序表明,表達(dá)蛋白的N-氨基酸序列與預(yù)測蛋白的一致,說明表達(dá)蛋白的確是目的蛋白質(zhì)?! ?.采用ReactiveRed120-Agarose親和層析法可有效純化原核表達(dá)的小麥LMW-GS。最佳洗脫條件為含0.02﹪SDS的0.1M乳酸-乳酸鈉(pH4.5)?! ?.目的蛋白微量摻粉品質(zhì)效應(yīng)研究表明摻粉形成面團(tuán)時,揉面曲線到達(dá)峰值時間

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