高分子量麥谷蛋白亞基1Bx14在花粉管通道法轉(zhuǎn)基因小麥中的表達(dá)研究.pdf

1、　　小麥?zhǔn)俏覈闹饕Z食作物之一，也是人們膳食中植物蛋白質(zhì)的主要來源。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高以及我國加入世界貿(mào)易組織，對小麥的品質(zhì)要求越來越高，但我國目前在生產(chǎn)上推廣的小麥品種品質(zhì)普遍較差，主要反映在加工品質(zhì)差，尤其是烘烤品質(zhì)。常規(guī)育種技術(shù)一直是小麥品質(zhì)育種的主要手段，成效顯著。但由于我國優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源的匱乏，再加上常規(guī)育種效率低，周期長等限制因素，延緩了品質(zhì)育種的進(jìn)程，因此尋求更為有效的途徑去改良小麥品質(zhì)是非常必要的。分子生

2、物學(xué)技術(shù)的發(fā)展正為小麥品質(zhì)的改良提供了一條有效的技術(shù)路線。近年來國內(nèi)外大量研究表明，高分子谷蛋白亞基與小麥烘烤品質(zhì)密切相關(guān)，并已建立起一套較為完整的以基因槍微粒子彈轟擊，以幼胚為受體的小麥品質(zhì)改良遺傳轉(zhuǎn)化體系。小麥高分子谷蛋白14和15亞基是我國優(yōu)質(zhì)小麥品種所特有的優(yōu)質(zhì)亞基，本研究旨在通過花粉管通道技術(shù)將HMW-GS1Bx14亞基導(dǎo)入小麥品種陜農(nóng)757，以改良其加工品質(zhì)，為我國小麥品質(zhì)改良尋找一種簡便快捷高效的育種方法。研究結(jié)果如下：

3、　　1、建立了一整套快速簡便的小麥植株總DNA的提取方法和外源目的基因PCR檢測體系，本實(shí)驗(yàn)采用基因池法對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行目的基因的檢測，先將小麥轉(zhuǎn)基因植株按每10株為一組進(jìn)行DNA提取、濃度檢測、PCR特異性擴(kuò)增，將檢測到的陽性組再進(jìn)行組內(nèi)單株DNA提取、濃度檢測、PCR特異性擴(kuò)增，進(jìn)而確定轉(zhuǎn)基因陽性植株，大大減少了工作量，節(jié)省了人力、物力、財(cái)力以及時(shí)間，大大提高了轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測效率，尤其是在受測群體較大時(shí)，此方法顯得更為經(jīng)濟(jì)有

4、效?！　?、通過對所獲得的618株小麥轉(zhuǎn)基因植株P(guān)CR檢測，共獲得了74株含HMW-GSlBx14基因的轉(zhuǎn)基因陽性植株，轉(zhuǎn)化率為12﹪?！　?、轉(zhuǎn)基因植株產(chǎn)生的種子(T1)的SDS-PAGE證明，HMW-GSlBx14基因已獲得表達(dá)，共發(fā)現(xiàn)有4種亞基變異類型：(1)1，7+9，2+12；(2)1，7+9，14，2+4+12；(3)1，14，2+12；(4)1，7+9，14，2+12；(4)所占比例最大，其次為(3)，(1)，(2)。