纖維蛋白止血粉的研究.pdf

1、第一部分纖維蛋白止血粉的研究.快速止血是拯救傷員生命的關(guān)鍵措施，研究高效簡便的止血劑成為實戰(zhàn)救治的迫切需要。各國學(xué)者爭相研究的是以纖維蛋白原和凝血酶為主要成分的生物粘合止血劑，現(xiàn)上市產(chǎn)品只有一種液體制劑—纖維蛋白粘合劑(FS)，F(xiàn)S具有很好的粘合作用，但不適于急性止血，粉劑、敷料等新劑型是目前國外(尤其美國軍方)正在研究中的新型止血劑。本研究的目的是研制以纖維蛋白原和凝血酶為主要成分的凍干粉劑，即纖維蛋白止血粉，爭取與國外同時或更早進入

2、臨床。 用Nitschmann組分為起始原料，本著工藝簡單，成本低，適于擴大生產(chǎn)，并且保證產(chǎn)品收率高和純度好的原則，建立了纖維蛋白原和凝血酶的純化工藝—低溫乙醇沉淀法和兩步離子交換柱層析法。加速穩(wěn)定性實驗估算出凝血酶凍干品具有較好的穩(wěn)定性，25℃，4℃和0℃時，活性損失10％需要的時間分別為161.8d(天)，4.1a(年)，6.2a，活性損失50％需要的時間分別為2.9a，26.7a，40.7a。纖維蛋白止血粉中纖維蛋白原、凝

3、血酶和氯化鈣三者的最佳配比實驗設(shè)計采用SAS中的約束混料設(shè)計方法，實驗結(jié)果經(jīng)曲面方程回歸分析估算出最佳比例和最小凝固時間，凝固時間小于20s的最佳比例為纖維蛋白原(可凝固蛋白的量，mg)：凝血酶(活性單位，I.U.)：氯化鈣(mg)=1：3.9～14.5：0.21～0.60。 纖維蛋白止血粉的藥效學(xué)實驗采用兩種動物(家兔和肝素化大鼠)，兩種模型(肝損傷滲血模型和股動脈切口急性出血模型)，檢測了3個指標(止血時間，30min內(nèi)的出

4、血量和30min內(nèi)血壓的變化)，每種模型分成四組，分別用不同的方法處理：①不處理；②紗布壓迫處理；③凝血酶(臨床用生物止血藥)加紗布壓迫處理；④纖維蛋白止血粉加紗布壓迫處理。實驗結(jié)果顯示，纖維蛋白止血粉對兩種動物的兩種出血模型均能在3min內(nèi)止血；對大鼠肝滲血模型，纖維蛋白止血粉處理組的出血量與常規(guī)紗布處理組之間有顯著性差異，與凝血酶處理組之間沒有顯著性差異，但30min末的血壓值與凝血酶處理組間有顯著性差異. 第二部分液質(zhì)聯(lián)用

5、技術(shù)對GS101動物體內(nèi)處置過程的研究.GS101是新合成的抗病毒單體化合物，屬于脫氧腺苷磷酸化物的非環(huán)化相似物，對逆轉(zhuǎn)錄病毒(如HIV病毒)和包括嗜肝病毒(如HBV)及皰疹病毒的一些DNA病毒有抑制作用，通過降低病毒DNA的轉(zhuǎn)錄能力而發(fā)揮抗病毒活性。為了明確GS101在動物體內(nèi)的處置過程，本課題對GS101的臨床前動物藥代動力學(xué)進行了創(chuàng)新性研究，研究方法采用液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜新技術(shù)。 建立的分析方法專屬性強，GS101的代謝

6、產(chǎn)物PMEA的血漿濃度在20ng/mL-4000ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)在0.9972-0.9989之間，準確度的相對偏差小于4.5％，日內(nèi)精密度小于5.5％，日間精密度小于5.8％，平均回收率為83.7％。 GS101的體內(nèi)外轉(zhuǎn)化實驗發(fā)現(xiàn)，GS101放入新鮮血漿中，全部轉(zhuǎn)化成唯一代謝物PMEA，灌胃給藥后的動物血液中也只檢測到PMEA，胃內(nèi)容物和腸內(nèi)容物中GS101和PMEA共存，胃中主要以GS101形式存在，腸

7、中主要以PMEA形式存在。 獼猴靜脈給藥GS101后，PMEA血漿濃度以雙指數(shù)形式下降，給藥2mg/kg后，表觀分布容積(Vd)為5.19L/kg?？诜o藥GS101后，PMEA的血藥濃度結(jié)果經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，達峰時間(Tmax)為0.99-1.70h，血漿半衰期(t1/2)為1.64-5.43h，絕對生物利用度為19.9％，機體總清除率(CL)為2.31-13.91L/(h.kg)，GS101的藥代動力學(xué)過程與劑量無關(guān)，AUC和Cm

8、ax基本與劑量成正比關(guān)系，AUC與給藥劑量的線性相關(guān)系數(shù)r=0.9998。連續(xù)7天給藥的穩(wěn)態(tài)藥代動力學(xué)參數(shù)谷濃度(Cmin)，峰濃度(Cmax)，達峰時間(Tmax)，平均血藥濃度(Cavg)和波動度(DF％)依次為49.4±16.1ng/mL，387.7±257.8ng/mL，1.6±0.7h，126.9±64.2ng/mL，254.8±72.4。大鼠口服GS101后的組織分布特點為，開始給藥后GS101和PMEA對動脈切口模型，纖維