纖維蛋白原異常的臨床和基礎(chǔ)研究.pdf

1、纖維蛋白原分子是由Aα、Bβ和γ鏈通過29對二硫鍵連接而成的六聚體，分子量為340kDa。纖維蛋白原3條肽鏈分別由簇集于4q28-4q31約50kb內(nèi)的3個獨(dú)立基因FGA、FGB和FGG編碼。纖維蛋白原分子有個基本功能：一是，作為血小板膜糖蛋白IIb/IIIa的受體，參與血小板的活化聚集；二是，在凝血酶作用下，從纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白凝塊。然而，目前對于纖維蛋白原的代謝尚有許多未解之處。通過對纖維蛋白原異常特別是遺傳性纖維蛋白原缺陷的

2、研究，有助于深入了解纖維蛋白原功能和代謝。纖維蛋白原異常通常分為高纖維蛋白原血癥、低纖維蛋白原血癥、無纖維蛋白原血癥、異常纖維蛋白原血癥和低異常纖維蛋白原血癥5種類型。我們在工作中發(fā)現(xiàn)高纖維蛋白原血癥、低纖維蛋白原血癥和低異常纖維蛋白原血癥患者各一例，我們對其病因和發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了初步研究。
　　 一、高纖維蛋白原血癥對凝血時間的影響
　　 目的：診斷一例Turner綜合征合并有肝細(xì)胞肝癌患者；證實(shí)高纖維蛋白原血癥致凝血時

3、間延長。方法：根據(jù)凝固法原理檢測患者手術(shù)前后血漿活化部分凝血酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)和凝血酶時間(TT)；運(yùn)用Clauss法、免疫比濁法和Westernblot分析血漿中纖維蛋白原水平；PCR擴(kuò)增編碼纖維蛋白原三肽鏈基因（FGA、FGB和FGG）的所有外顯子以及外顯子和內(nèi)含子交界區(qū)，并直接測序分析；免疫組化法分析癌組織中纖維蛋白原的表達(dá)；免疫法檢測患者血漿皮質(zhì)醇、白介素-6和可溶性組織因子(sTF)的濃度。結(jié)果癌組織中纖

4、維蛋白原的表達(dá)高于對照；手術(shù)前患者血漿纖維蛋白原抗原和活性分別為15.1士0.3g/1和14.4士o.8g/l。手術(shù)前血漿中纖維蛋白原及其組分和代謝產(chǎn)物泳動速率與正常對照比較無差異，而灰度明顯加深?；驕y序未發(fā)現(xiàn)堿基改變。血漿IL-6、皮質(zhì)醇水平和sTF明顯高于對照。血漿中纖維蛋白原被吸附逐漸降至正常后，延長的APTT、PT和TT值逐漸恢復(fù)正常。腫瘤被切除后，血漿纖維蛋白原水平、延長的凝血時間和升高的炎癥因子均降至正常。結(jié)論：Turne

5、r綜合征合并有巨塊型肝癌診斷明確；巨塊型肝癌和高血漿IL-6和皮質(zhì)醇水平是高纖維蛋白原血癥的原因；高纖維蛋白原導(dǎo)致APTT、PT和TT值明顯延長；高纖維蛋白原延長PT和TT值的作用被高血漿組織因子水平削弱。
　　 二、纖維蛋白原Aa鏈Argl6His突變致遺傳性異常纖維蛋白原血癥
　　 目的：對一例遺傳性異常纖維蛋白原血癥家系進(jìn)行表型和基因型分析。方法：采集家系3代6人外周血，血凝儀檢測APTT、PT和TT。纖維蛋白原活

6、性和抗原分別用Clauss法和免疫比濁法檢測，westernblot分析血漿纖維蛋白原及其片斷分布。PCR擴(kuò)增纖維蛋白原基因FGA、FGB和FGG所有外顯子及其側(cè)翼序列，PCR產(chǎn)物純化后直接測序。結(jié)果：先證者APTT、PT正常，TT明顯延長；纖維蛋白原抗原正常，活性降低；先證者母親和胞姐表型與之相似?；蚍治鲲@示先證者纖維蛋白原FGA基因2號外顯子G1233→A雜合堿基改變（密碼子CGT→CAT），導(dǎo)致Argl6His錯義突變，該突變源

7、于母系。結(jié)論：纖維蛋白原Aa鏈Arg16His雜合錯義突變是遺傳性異常纖維蛋白原血癥的分子基礎(chǔ)。
　　 三、纖維蛋白原Bβ鏈基因4個堿基插入突變導(dǎo)致遺傳性低異常纖維蛋白原血癥
　　 目的：對一例遺傳性低異常纖維蛋白原血癥家系的病因和發(fā)病機(jī)制進(jìn)行初步研究。方法：采集家系4代16人外周血，血凝儀檢測APTT、PT、TT和纖維蛋白原活性（Clauss法）；免疫比濁法和ELISA法檢測纖維蛋白原抗原；Westernblot分析纖

8、維蛋白原抗體的特異性和血漿纖維蛋白原Y鏈的表達(dá)；PCR擴(kuò)增纖維蛋白原基因并直接測序。結(jié)果：先證者的凝血時間明顯延長：APTT76.5sec(N28-40sec)，PT79.5sec(N11-14.5sec)，TT79.1sec(N14-21sec);纖維蛋白原活性無法檢測，抗原量0.43g/l(N2.0-5.0g/l);家系其他成員的APTT、PT和TT值均正常，先證者父親、母親、胞弟和兒子的血漿纖維蛋白原活性比正常對照略低?；蚍治霭l(fā)

9、現(xiàn)先證者FGBexon2核苷酸2819-2820之間插入GTTT，該突變?yōu)榧兒细淖儯瑢?dǎo)致纖維蛋白原分子Bβ鏈在40位氨基酸處發(fā)生移碼并在50位氨基酸處提前終止，該突變在先證者父母親、胞弟和兒子為雜合狀態(tài)。纖維蛋白原抗體特異性鑒定結(jié)果顯示羊抗人纖維蛋白原Y鏈C末端多克隆抗體僅與γ鏈反應(yīng)。Westernblot分析：在還原性條件下，纖維蛋白原γ鏈的表達(dá)量與正常一致；在非還原性條件下，在148KDa處的條帶灰度稍強(qiáng)于對照。結(jié)論：FGBGTTT