纖維蛋白原降解產(chǎn)物對(duì)巨噬泡沫細(xì)胞形成和功能的作用.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前炎癥損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō)得到人們的公認(rèn)，認(rèn)為AS的發(fā)病過(guò)程是一種慢性的炎癥反應(yīng)。巨噬源性泡沫細(xì)胞在AS病理過(guò)程中起重要作用，巨噬泡沫細(xì)胞的形成及其作用是AS斑塊損傷形成、發(fā)展和崩解的關(guān)鍵。 近年來(lái)，AS流行病學(xué)調(diào)查研究表明血漿高水平纖維蛋白原降解產(chǎn)物(fibrinfibrinogendegradationproducts，F(xiàn)FDP)

2、是一重要、獨(dú)立的心腦血管疾病危險(xiǎn)相關(guān)因素。通常FFDP以及其組分D-dimer被認(rèn)為是凝血活性指標(biāo)，因?yàn)樗鼈兂３Ｊ歉哐^(guò)程前后的關(guān)鍵性因素。目前，越來(lái)越多的證據(jù)表明FFDP和D-dimer不僅與凝血過(guò)程有關(guān)，而且與AS炎癥反應(yīng)相關(guān)。 本課題旨在研究FFDP對(duì)AS過(guò)程中巨噬源性泡沫細(xì)胞形成和功能的影響。研究結(jié)果主要概括為以下四個(gè)方面： 1.采用人類單核細(xì)胞系U937細(xì)胞與ox-LDL共孵育，培養(yǎng)為U937泡沫細(xì)胞。收集的

3、U937泡沫細(xì)胞采用油紅O染色后，光鏡下觀察，胞漿內(nèi)出現(xiàn)的明顯紅染脂質(zhì)顆粒，符合泡沫細(xì)胞形態(tài)特征。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)清道夫受體的表達(dá)，結(jié)果顯示FFDP刺激可使清道夫受體表達(dá)量顯著升高。同時(shí)，F(xiàn)FDP刺激后能顯著促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞吞噬氧化低密度脂蛋白形成泡沫細(xì)胞。 2.體外原代培養(yǎng)兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，測(cè)定U937細(xì)胞與內(nèi)皮間粘附率。對(duì)照組U937細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附率為8.04％。結(jié)果表明，經(jīng)FFDP處理后，U937細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘

4、附有顯著的增加。FFDP50μg/L組的粘附率為26.9％；100μg/L組的粘附率為34.2％；150μg/L組的粘附率為36.3％；300μg/L組的粘附率為44.8％。 3.采用美國(guó)SuperArray公司動(dòng)脈粥樣硬化疾病基因芯片OligoAtherosclerosisMicroarray(OHS-038)研究纖維蛋白原降解產(chǎn)物中D-dimer組分對(duì)巨噬細(xì)胞動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)128個(gè)基因表達(dá)的調(diào)控作用。D-dimer刺激后，

5、27個(gè)基因在芯片中顯著上調(diào)，其上調(diào)量與對(duì)照的U937細(xì)胞相比超過(guò)2倍。我們將顯著改變的基因按照其功能分為粘附分子、胞外間質(zhì)分子、脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)代謝基因、細(xì)胞生長(zhǎng)分化基因、核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子和氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白6類。 4.采用SYBRreal-timePCR方法，進(jìn)一步將VCAM1，MMP-9，OLR1，VEGFa和PPARa進(jìn)行了mRNA表達(dá)水平的確認(rèn)，結(jié)果與芯片結(jié)果一致，證明D-dimer能顯著調(diào)控VCAM1，MMP-9，OLR1，VEG