激烈熱球菌胞外α-淀粉酶的體外定向進(jìn)化.pdf

1、α-淀粉酶，按酶委會(Enzyme Commission)的標(biāo)準(zhǔn)為EC3．2．1．1，是指一類作用于淀粉分子，從分子內(nèi)部切開α-，4鍵，生成糊精和還原糖的水解酶，產(chǎn)物的末端葡萄糖殘基C1碳原子為α-構(gòu)型，故稱α-淀粉酶。目前淀粉糖生產(chǎn)工業(yè)主要應(yīng)用的是耐高溫α-淀粉酶，多為BLA(Bacillus Licherliformis α-amylase)，但BLA最適pH值(6.0)較高，需要添加Ca<'2+>。近年研究發(fā)現(xiàn)PFA(Pyroco

2、ccus furiosusextracellular α-amylase)活性不依賴于Ca<'2+>，具有極大的工業(yè)應(yīng)用潛力。本文以激烈熱球菌胞外α-淀粉酶(PFA)為研究對象，用易錯PCR的方法構(gòu)建PFA基因隨機(jī)突變文庫，庫容量約為10000，在96孔板中，以3，5-二硝基水楊酸為顯色劑，測定不同pH值條件下的酶活力，肉眼直接觀察顯色結(jié)果，篩選得到一株突變體(muta)，經(jīng)過測序和序列比對發(fā)現(xiàn)全序列435個氨基酸中，只有一個氨基酸發(fā)生