不同位置的負(fù)壓吸引法對靜脈淤血皮瓣微血管的影響.pdf

1、目的:通過建立兔下腹部靜脈淤血皮瓣模型，研究不同位置的負(fù)壓吸引法對靜脈淤血皮瓣救治過程中微循環(huán)的影響，以探討簡便有效的靜脈淤血皮瓣救治方法，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、實驗動物:成年新西蘭長耳白兔健康清潔級30只，雌雄不拘，雌兔未孕，體重2.5～3Kg，由河北醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。
　　 2、動物分組:隨機將動物分為2個大組:激光多普勒血液灌流成像儀掃描組簡稱掃描組，標(biāo)本采集組簡稱取材組

2、，每組15只動物。以兔腹部前正中線為界，兩側(cè)各形成長寬比3∶1(12cm×4cm)的軸型皮瓣，共60個皮瓣。掃描組與取材組各組內(nèi)隨機均分為A、B、C三組，掃描組與取材組的A組合并為對照組;掃描組與取材組的B組合并為近端引流組;掃描組與取材組的C組合并為遠(yuǎn)端引流組。A、B、C組每組共計20個皮瓣，包括10個掃描皮瓣和10個取材皮瓣。
　　 3、動物模型建立及處理:皮瓣模型制備前三天術(shù)區(qū)各皮。稱量體重，麻醉成功后仰臥位固定于實驗操作

3、臺上，常規(guī)消毒鋪巾，以腹壁下動脈及淺靜脈為中軸，亞甲藍(lán)劃出12cm×4cm的皮瓣，蒂設(shè)計在兔腹下端。切開皮瓣，在肉膜下層掀起皮瓣。A組、B組、C組均于腹壁下靜脈及髂腹股溝靜脈分叉處上方分離動靜脈，將靜脈結(jié)扎剪斷。A組原位連續(xù)縫合肉膜層和皮膚層;B組和C組將皮瓣分離成功后，取4.5頭皮針剪掉針頭，修剪4個側(cè)孔，側(cè)孔間距約為0.5cm，分別放置于皮瓣近端（蒂部）和皮瓣遠(yuǎn)端下方，垂直于皮瓣長軸方向，固定于肌肉膜層，保證引流管位置恒定，連續(xù)縫合

4、肉膜層和皮膚層。B、C組均于術(shù)后3天拔除引流管。
　　 4、掃描組動物采用激光多普勒灌流成像儀(laserDopplerimaging，LDI)進(jìn)行兔腹部皮瓣的掃描。掃描皮瓣共30個，將掃描皮瓣均分三段，測定整體及每段皮瓣術(shù)前2小時、術(shù)后2小時、4小時、6小時、8小時、24小時、3天和7天的血流灌注(Perfuseunit，PU)值。
　　 5、取材組標(biāo)本采集與處理:取材組共30個皮瓣，按照以下方法進(jìn)行標(biāo)本采集與處理:<

5、br>　　 5.1、分別在術(shù)后4小時、24小時、3天、5天和7天共五個時相，切取皮瓣中段區(qū)域0.5cm×0.5cm皮膚組織塊作為標(biāo)本。標(biāo)本投入10％中性福爾馬林固定液固定，常規(guī)脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制成4μm切片。
　　 5.2、分別于術(shù)前2小時、術(shù)后4小時、8小時、24小時及術(shù)后3天在皮瓣遠(yuǎn)段區(qū)域取材，標(biāo)本大小為0.5cm×0.5cm。取材后制成10％的組織勻漿液，-20℃冰箱保存，檢測皮膚組織中SOD活性。
　

6、　 6、觀測指標(biāo)及方法
　　 6.1、大體觀察:術(shù)后觀察動物的一般情況，包括皮瓣顏色、質(zhì)地、有無腫脹等。
　　 6.2、引流量:記錄B組及C組術(shù)后4小時、24小時、2天和3天總引流量。
　　 6.3、皮瓣成活率測定:掃描組動物術(shù)后14天用標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)格試紙測量皮瓣存活面積與總面積，求出皮瓣成活面積與總面積之比，皮瓣成活率=皮瓣成活面積/總面積×100％。壞死標(biāo)準(zhǔn)為皮膚針刺無出血、顏色變黑、質(zhì)地變硬。
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7、.4、皮瓣血流灌注情況:激光多普勒血液灌流成像儀在術(shù)前2小時、術(shù)后2小時、4小時、6小時、8小時、24小時、3天和7天對淤血皮瓣微循環(huán)進(jìn)行動態(tài)觀察，了解皮瓣血流灌注情況，記錄血液灌流值(PU)。
　　 6.5、HE染色，光鏡下觀察病理組織學(xué)變化。
　　 6.6、免疫組織化學(xué)觀察:檢測微血管密度(microvesseldensity,MVD)和血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor

8、,VEGF)表達(dá)。
　　 6.7、SOD活性的檢測:按試劑說明書操作檢測組織樣本中SOD活性。
　　 7計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、大體觀察:術(shù)后4小時各組皮瓣遠(yuǎn)端均出現(xiàn)不同程度的腫脹淤血，術(shù)后24小時各組皮瓣腫脹加劇，術(shù)后第2天各組皮瓣淤血腫脹達(dá)到高峰。術(shù)后第3天B組和C組皮瓣遠(yuǎn)端的淤血腫脹開始

9、逐漸消退，A組皮瓣遠(yuǎn)端的淤血腫脹進(jìn)一步加重，之后各組術(shù)后皮瓣淤血組織界限逐漸分明。術(shù)后第7天，各組皮瓣中遠(yuǎn)段出現(xiàn)面積不等的壞死區(qū)域，壞死部分組織呈現(xiàn)焦痂樣，質(zhì)地變硬。
　　 2、引流液量:術(shù)后4小時、24小時、2天和3天總引流液量，C組均明顯高于B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 3、皮瓣存活面積的測量:掃描組皮瓣術(shù)后14天，A、B、C組皮瓣成活率分別為51.7％±9.2％、67.5％±8.9％、82.5％±

10、8.2％，三組皮瓣成活率比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，兩兩比較有顯著差異（P＜0.01）。
　　 4、激光多普勒微循環(huán)圖像儀掃描結(jié)果:
　　 掃描組皮瓣在移植術(shù)后2小時內(nèi)各組微血管灌流量呈急劇的下降趨勢，B、C組在術(shù)后4小時微血管灌流量呈上升趨勢;A組皮瓣微血管灌流量繼續(xù)下降，術(shù)后8小時開始上升。
　　 A、B、C組皮瓣總灌流量在術(shù)后4小時開始出現(xiàn)顯著差別，B、C組較A組微血管灌流量恢復(fù)快，這種顯著差異持續(xù)到

11、觀察時間終點術(shù)后第7天。三組皮瓣總灌流量比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01），各組兩兩比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01）。
　　 C組與B組比較:皮瓣微血管總灌流量C組高于B組，在皮瓣遠(yuǎn)段1/3區(qū)域，B組與C組術(shù)后24小時出現(xiàn)明顯差異(P＜0.01），這種差異持續(xù)到觀察終點。
　　 5、HE染色組織學(xué)觀察:A組術(shù)后第1、3天毛細(xì)血管管腔內(nèi)紅細(xì)胞聚集嚴(yán)重，術(shù)后第7天毛細(xì)血管數(shù)量明顯減少;B、C組微血管數(shù)量較多，可見新生毛細(xì)血管出

12、現(xiàn);C組在較多區(qū)域可以觀察到新生血管形成。
　　 6、微血管密度(MVD):A、B、C組術(shù)后4小時MVD開始增加，C組MVD值最高，B組次之，A組最低。B、C組增加相對迅速，第5天達(dá)值峰，之后維持在一定水平;A組MVD增加相對緩慢，第3天達(dá)值峰，之后逐漸降低;B、C組的MVD明顯高于A組（P＜0.01）。
　　 7、VEGF的表達(dá):A、B、C組術(shù)后VEGF蛋白表達(dá)即呈陽性，切片可見多數(shù)血管內(nèi)皮內(nèi)有棕黃色顆粒。術(shù)后C組一直

13、處于較高水平，VEGF染色陽性血管最多，B組次之，A組最少，術(shù)后第3、5、7天各組兩兩比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。C組陽性系數(shù)峰值在術(shù)后5天，峰值之后緩慢下降;B組峰值出現(xiàn)在術(shù)后第5天，A組峰值出現(xiàn)在術(shù)后第3天。
　　 8、SOD的活力:皮瓣組織中的SOD活性術(shù)后均有不同程度降低，在術(shù)后24h均降至最低水平，各組兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01）;以后有逐漸升高的趨勢，術(shù)后3天各組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　

14、 結(jié)論:
　　 1、負(fù)壓吸引法可減輕靜脈淤血皮瓣的淤血范圍及程度，皮瓣遠(yuǎn)端負(fù)壓引流更利于積血積液排出，效果優(yōu)于皮瓣近端負(fù)壓引流。
　　 2、負(fù)壓吸引法可顯著改善皮瓣血流灌注情況，皮瓣遠(yuǎn)端負(fù)壓引流管可以有效的維持皮瓣遠(yuǎn)端的微循環(huán)，為皮瓣遠(yuǎn)期成活提供保障，提高靜脈淤血皮瓣的救治率。
　　 3、負(fù)壓吸引法可促進(jìn)靜脈淤血皮瓣中VEGF表達(dá)，有利于新生血管的形成，增加靜脈淤血皮瓣中微血管密度，提高皮瓣成活率。