大劑量維生素D-,3-對(duì)不同性別大鼠血管鈣化和骨代謝的影響.pdf

1、[目的] 觀察大劑量維生素D3對(duì)不同性別大鼠心血管及骨代謝的影響，研究血管鈣化和骨量改變之間的關(guān)聯(lián)，并對(duì)其可能的作用機(jī)制作初步探討；同時(shí)分別觀察辛伐他汀對(duì)雌性大鼠和司坦唑醇對(duì)雄性大鼠在大劑量維生素D3導(dǎo)致的大鼠血管鈣化和骨代謝改變后的藥理作用，為進(jìn)一步了解骨質(zhì)疏松與心血管疾病之間的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法] 實(shí)驗(yàn)一：大劑量維生素D3對(duì)雄性大鼠心血管和骨代謝的影響及司坦唑醇的藥理作用30只8～10周齡的SPF級(jí)雄

2、性SD大鼠，隨機(jī)分成3組：分別為正常對(duì)照組(n=10)、維生素D3模型組(n=10)和司坦唑醇組(n=10)。動(dòng)物分組當(dāng)天定為0h，分別在0、24、48h給予維生素D3模型組、司坦唑醇組維生素D3 20萬(wàn)單位·kg-1，正常對(duì)照組給予等容量蒸餾水對(duì)照灌胃。實(shí)驗(yàn)第四天開始，司坦唑醇組給予司坦唑醇5mg·kg-1·d-1進(jìn)行治療，正常對(duì)照組和維生素D3模型組大鼠給予等量的蒸餾水對(duì)照灌胃。實(shí)驗(yàn)全程均飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料，實(shí)驗(yàn)周期為6周。 實(shí)驗(yàn)

3、二：大劑量維生素D3對(duì)雌性大鼠心血管和骨代謝的影響及辛伐他汀的藥理作用30只8-10周齡的SPF級(jí)雌性SD大鼠，隨機(jī)分成3組：分別為正常對(duì)照組(n=10)、維生素D3模型組(n=10)和辛伐他汀組(n=10)。動(dòng)物分組當(dāng)天定為0h，分別在0、24、48h給予維生素D3模型組、辛伐他汀組維生素D3 25萬(wàn)單位·kg-1，正常對(duì)照組在同一時(shí)刻給予等容量蒸餾水對(duì)照灌胃。實(shí)驗(yàn)第四天開始，辛伐他汀組給予辛伐他汀5mg·kg-1·d-1進(jìn)行治療，正

4、常對(duì)照組和維生素D3模型組大鼠同時(shí)刻給予等量的蒸餾水對(duì)照灌胃。實(shí)驗(yàn)全程均飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料，實(shí)驗(yàn)周期為6周。 兩次實(shí)驗(yàn)均在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前第13、14天和第3、4天分別皮下注射鹽酸四環(huán)素和鈣黃綠素作骨熒光標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，心臟取血處死大鼠，取主動(dòng)脈弓，經(jīng)固定、包埋、切片，HE染色后光鏡下觀察病理變化；取從右腎動(dòng)脈與髂總動(dòng)脈交匯處為標(biāo)志，向上取1cm腹主動(dòng)脈，烘干、稱重、濃鹽酸硝化，用ICP離子性發(fā)射光譜儀測(cè)血管鈣含量；取主動(dòng)脈弓至胸主動(dòng)脈段

5、血管1cm，沿縱軸剪開后Von Kossa染色，用Image-Pro Plus 6.0病理圖像分析軟件計(jì)算大鼠鈣化斑塊面積百分比；取大鼠血清，檢測(cè)大鼠血脂含量；取左側(cè)脛骨不脫鈣包埋后制成骨切片，通過(guò)半自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行松質(zhì)骨(上段)的骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)量；取左側(cè)股骨，用858 Mini Bionix型材料測(cè)試系統(tǒng)，分析大鼠股骨生物力學(xué)性能，然后將生物力學(xué)檢測(cè)后的骨材料烘干、消化，分成兩份，分別使用ICP離子性發(fā)射光譜儀和羥脯氨酸試劑盒

6、(經(jīng)典法)檢測(cè)其骨鈣、磷以及骨膠原的含量。 [結(jié)果] 1.大劑量維生素D3可使雄性大鼠和雌性大鼠血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇含量均升高，而血清高密度脂蛋白膽固醇和甘油三酯含量均降低，不同性別大鼠變化趨勢(shì)均相同，無(wú)特異性。 2.大劑量維生素D3可造成雄性大鼠和雌性大鼠血管鈣化的病理改變，無(wú)性別特異性。 3.大劑量維生素D3可使雄性大鼠松質(zhì)骨骨量明顯丟失，脛骨上段骨小梁面積百分率(％Tb.Ar)降低了49

7、.8％(P<0.05)，骨形成及骨礦化的指標(biāo)明顯下降：熒光周長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)(％L.Pm)降低了67.7％(P<0.05)、骨形成率(BFR/BS、BFR/BV、BFR/TV)分別降低了64.3％(P<0.05)、12.4％(P<0.05)和64.7％(P<0.05)；骨生物力學(xué)性能明顯下降：最大載荷下降了14.62％(P<0.05)、斷裂載荷下降了16.58％(P<0.05)。股骨單位骨量中的骨羥脯胺酸(Hyp)、骨鈣、骨磷含量均降低。

8、 4.大劑量維生素D3使雌性大鼠松質(zhì)骨骨量明顯增加，骨小梁數(shù)量明顯增加，間距縮小，小梁彼此融合成塊狀，結(jié)構(gòu)紊亂，失去立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，脛骨上段的骨小梁面積百分率(％Tb.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)分別增加了235.7％、486.7％(P<0.05)；和骨小梁分離度(Tb.Sp)減少了35.0％(P<0.05)；骨形成及骨礦化的指標(biāo)增加：熒光周長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)(％L.Pm)增加了79.2(P<0.05)、骨礦化沉積率(MAR)增加了19.2％

9、、骨形成率(BFR/BS、BFR/TV)分別增加了109.4％(P<0.05)和186.0％(P<0.05)。骨生物力學(xué)性能明顯下降：最大載荷下降了16.50％(P<0.05)、斷裂載荷下降了12.48％(P>0.05)。骨羥脯胺酸(Hyp)顯著降低(P<0.05)，股骨骨鈣、磷含量均增加。 5.辛伐他汀對(duì)大劑量維生素D3導(dǎo)致的雌性大鼠血管鈣化及骨代謝的影響辛伐他汀可調(diào)節(jié)血脂代謝，增加血清高密度脂蛋白膽固醇含量，降低血管鈣化鈣化

10、面積，有效抑制大劑量維生素D3導(dǎo)致的血管鈣化，但辛伐他汀對(duì)大劑量維生素D3導(dǎo)致的雌性大鼠骨代謝紊亂無(wú)明顯作用。 6.司坦唑醇對(duì)雄性大鼠血管鈣化及骨代謝的影響司坦唑醇可增加大劑量維生素D3導(dǎo)致的大鼠脛骨骨小梁的數(shù)量，增強(qiáng)股骨生物力學(xué)性能，對(duì)雄性大鼠的骨質(zhì)疏松有一定的防治作用，但司坦唑醇對(duì)大劑量維生素D3導(dǎo)致的雄性大鼠血管鈣化無(wú)明顯作用。 [結(jié)論]： 用20萬(wàn)單位·kg-1·d-1的維生素D3連續(xù)灌胃三天，可使雄性大

11、鼠血清總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量增加，主動(dòng)脈出現(xiàn)鈣化，同時(shí)大鼠骨量丟失，骨生物力學(xué)性能明顯下降。司坦唑醇對(duì)雄性大鼠血管鈣化無(wú)明顯的抑制作用，但司坦唑醇可增加大鼠脛骨骨小梁的數(shù)量，增強(qiáng)股骨生物力學(xué)性能，對(duì)雄性大鼠的骨質(zhì)疏松有一定的防治作用；用25萬(wàn)單位·kg-1·d-1的維生素D3連續(xù)灌胃三天，可使雌性大鼠血清總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量增加，主動(dòng)脈出現(xiàn)鈣化，同時(shí)大鼠骨量增加，骨生物力學(xué)性能明顯下降。辛伐他汀可有效調(diào)節(jié)雌性大鼠血