維生素C、D-,3-和9順式維甲酸對豬脂肪細胞增殖與分化的影響.pdf

1、本文利用分離培養(yǎng)的原代豬前體脂肪細胞，利用細胞培養(yǎng)、油紅O染色及提取法，半定量RT-PCR等細胞生物學和分子生物學技術，在體外較為系統(tǒng)地研究了維生素C、D3和9順式維甲酸對豬脂肪細胞增殖和分化及分化過程中成熟脂肪細胞轉(zhuǎn)錄因子和脂肪形成相關基因轉(zhuǎn)錄時序表達的影響，探討了維生素C、D<,3>和9cisRA維生素類物質(zhì)對豬脂肪細胞發(fā)育的調(diào)控機制。主要研究結(jié)果如下： 1、利用SQRT-PCR法檢測，RXRIα腎臟組織中表達量最高，其次是

2、肌肉和肝臟組織，再次是皮下脂肪組織、脾臟和肺，在心臟組織中表達量最低； 2、維生素C以劑量和時間依賴的方式促進豬脂肪細胞的增殖分化。SQRT-PCR結(jié)果顯示，250 μmol/L Vit C通過上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子：PPARγ和RXRα mRNA的表達，促進脂肪形成相關基因LPL、SCD和PEPCK mRNA的表達，進而促進前體脂肪細胞的分化； 3、維生素D<,3>在1×10<'-4>～1μmol/L，的濃度范圍內(nèi)以劑量和時間依

3、賴的方式抑制豬脂肪細胞的增殖和分化。SQRT-PCR結(jié)果顯示，1μmol/L，的VD3在分化第1和5天，顯著抑制PPARγ和RXRαmRNA的表達(P<0.05)，同時下調(diào)LPL、PEPCK、SCD、GPDH和Glut4 mRNA的表達。但在分化至第3和7天，因未添加維生素D<,3>，這些基因的表達量雖上升，但不能恢復至正常水平； 4、10μmol/L的9順式維甲酸以時間依賴的方式抑制豬脂肪細胞的分化。聯(lián)合1gmol/LVD<,

4、3>則使抑制作用加強。SQRT-PCR結(jié)果顯示，10 gmol/L9順式維甲酸顯著下調(diào)PPARγ和RXRα mRNA的表達，同時也下調(diào)LPL、PEPCK、SCD、GPDH和Glut4 mRN,A的表達。當在第5天不添加9順式維甲酸，培養(yǎng)至第7天，檢測到成熟脂肪細胞中轉(zhuǎn)錄因子的表達量上調(diào)，脂肪形成相關基因的表達也上升，但不會恢復至正常水平。但培養(yǎng)基中同時存在維生素D<,3>時，分別培養(yǎng)至第1和5天，9順式維甲酸的抑制效應得到增強，即明顯降