大鼠皮層膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)牽張損傷模型的建立及繼發(fā)性炎性反應(yīng)作用機(jī)制的研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分、大鼠皮層膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)牽張損傷模型的建立 目的：建立大鼠皮層膠質(zhì)細(xì)胞體外牽張損傷模型。 方法：體外培養(yǎng)SD大鼠皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞，接種于Bioflex 6孔培養(yǎng)板，將其與牽張損傷裝置Cell Injury Controller II 相連接，選擇平均脈沖壓力18PSI、25PSI和32PSI打擊細(xì)胞,硅膠膜的變形距離分別為5.5mm、6.5mm和7.5mm。據(jù)此，將實(shí)驗(yàn)組分為5.5mm組

2、、6.5mm組、7.5mm組。同時(shí)設(shè)立對(duì)照組，不作牽張損傷。分別在損傷后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定培養(yǎng)上清液中的LDH含量和膠質(zhì)細(xì)胞的PrI染色陽(yáng)性率，以確定損傷的程度。 結(jié)果：硅膠膜的變形程度越大，牽張損傷介導(dǎo)的LDH釋放量越大，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；隨著細(xì)胞受到的牽張損傷不斷加重，被PrI紅染的細(xì)胞核數(shù)量亦相應(yīng)增多，損傷后0h、2h、6h、24h，6.5mm組、7.5mm組與對(duì)照組相比，PrI染色陽(yáng)性

3、率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論：成功建立了大鼠皮層膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)的體外牽張損傷模型，可分別模擬輕、中、重度損傷。使用方便，可重復(fù)性好，可用于顱腦創(chuàng)傷的病理機(jī)制和藥物作用的進(jìn)一步研究。 第二部分、膠質(zhì)細(xì)胞牽張損傷后繼發(fā)性炎性反應(yīng)作用機(jī)制的研究 目的：探討膠質(zhì)細(xì)胞牽張損傷后繼發(fā)性炎性反應(yīng)的作用機(jī)制。 方法：建立大鼠皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞中度牽張損傷模型，測(cè)定損傷前及損傷后30min、2h、12h、24h、

4、48h、72h培養(yǎng)上清液中TNF-α及TGF-β1的含量。 結(jié)果：損傷后不同時(shí)間點(diǎn)，損傷組TNF-α和TGF-β1的含量與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。大鼠皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞在中度牽張損傷后，隨即伴有TNF-α和TGF-β1的釋放，且速度較快，損傷后30min即有明顯升高，并于損傷后12h達(dá)到高峰，之后逐步下降。而TGF-β1的釋放則相對(duì)較慢，在損傷后的早期，其釋放曲線明顯較TNF-α平坦，在TNF-α已經(jīng)達(dá)到頂