大鼠重癥急性胰腺炎繼發(fā)性肝、肺損傷模型的建立及相關(guān)炎癥因子研究.pdf

1、目的:(1)通過夾閉胰頭部的方法建立一種新型大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肝損傷的動物模型(2)通過夾閉胰頭部的方法建立一種新型大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷的動物模型。(3)觀察大鼠重癥急性胰腺炎繼發(fā)性肺損傷肺組織中低氧誘導(dǎo)因子1αmRNA、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶mRNA、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、髓過氧化物酶(MPO)的變化情況,探討HIF-1α、iNOS、NO在SAP-LI中的作用,以便為SAP-LI的診治提供理論基礎(chǔ)。
　

2、　方法:(1)將SPF級健康雄性SD大鼠180只隨機分為:對照組、假手術(shù)組、肝損傷模型組,每組60只。再分別將每個分組中的60只大鼠隨機分為6個分組,包括0h、6h、12h、18h、24h、36h組,每組10只大鼠。肝損傷模型組用16cm彎止血鉗夾閉胰頭2小時后松開。同時在相應(yīng)時間點建立對照組及假手術(shù)組。在造模完成后,分別于相應(yīng)各時間點采集血液、肝臟組織、胰腺組織標(biāo)本。行血清淀粉酶(serumamylase,AMY)、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移

3、酶(alanineaminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase,AST)、血液中性粒細(xì)胞百分比檢測,行肝臟組織、胰腺組織病理學(xué)觀察。(2)將SPF級健康雄性SD大鼠210只隨機分為:對照組、假手術(shù)組、重癥急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷模型組,每組70只。再分別將每個分組中的70只大鼠隨機分為7個分組,包括0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h組,每組10只大鼠。

4、SAP-LI模型組用16cm彎止血鉗夾閉胰頭2h后松開。假手術(shù)組于相應(yīng)各時間點開腹后,僅輕輕翻動胰腺10次后放回其解剖位置。正常對照組除麻醉3h外不做任何處理。在造模完成后,分別于相應(yīng)各時間點采集血液、肺泡灌洗液、肺組織、胰腺組織標(biāo)本。行血淀粉酶、總蛋白、中性粒細(xì)胞百分比檢測,行大鼠肺組織濕/干重比,肺泡灌洗液蛋白檢測,行肺組織、胰腺組織病理學(xué)觀察。(3)將210只SPF級健康雄性SD大鼠隨機分為:對照組、假手術(shù)組、SAP-LI模型組,

5、每組70只。再將每組中的70只大鼠隨機分為7個分組,包括0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h組,每組10只大鼠。SAP-LI模型組采用夾閉法建模。造模完成后,分別于相應(yīng)各時間點采集血液、肺泡灌洗液、肺組織標(biāo)本。行血漿總蛋白檢測,行大鼠肺組織濕/干重比,肺泡灌洗液蛋白檢測,行肺組織HIF-1mRNA、iNOSmRNAqRT-PCR檢測及NO、MDA、MPO檢測,行肺組織病理學(xué)觀察。
　　結(jié)果:(1)肝損傷模型組大鼠AM

6、Y12h[(5052.1±114.9)U/L]、中性粒細(xì)胞百分比值在12h[(75.2±5.8)％]、ALT12h[(52.6±5.9)U/L]、AST12h[(629.5±57.4)]達到峰值,均顯著高于其它時間點組(P<0.05)。肝損傷模型組與對照組和假手術(shù)組同一時間點組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。病理組織學(xué)觀察可見造模后隨時間進程胰腺炎呈加重表現(xiàn),肝組織損傷24h最重。肝損傷模型組血清淀粉酶與血液中性粒細(xì)胞百分比、

7、ALT、AST呈正相關(guān)(r=0.796,P<0.01;r=0.710,P<0.01;r=0.875,P<0.01)。胰腺病理學(xué)評學(xué)與肝臟病理學(xué)評分呈正相關(guān)(rs=0.919,P<0.01)。(2)SAP-LI模型組大鼠血清淀粉酶12h(5052.1U/L±114.9U/L,P<0.01)、中性粒細(xì)胞百分比值12h(75.2%±5.8%,P<0.05)達到峰值,大鼠肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值36h(0.009021±0.000107,P<

8、0.01)達到高峰;大鼠肺組織濕/干重比36h(1.2001±0.0443,P<0.01)達到最小值。SAP-LI模型組與對照組和假手術(shù)組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。病理組織學(xué)觀察可見造模后隨時間進程胰腺炎呈加重表現(xiàn),肺組織損傷36h最重。SAP-LI模型組血清淀粉酶與血液中性粒細(xì)胞百分比、肺濕干質(zhì)量比均呈正相關(guān)(r=0.794,P<0.01;r=0.365,P=0.002)。中性粒細(xì)胞百分比與肺濕干質(zhì)量比呈正相關(guān)(r=

9、0.356,P=0.003)。肺濕干質(zhì)量比、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.717,P<0.01)。胰腺病理學(xué)評分與肺臟病理學(xué)評分呈正相關(guān)(r=0.934,P<0.01)。(3)SAP-LI模型組大鼠肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值36h(0.009021±0.000107,P<0.01)達到高峰;大鼠肺組織濕/干重比36h(1.2001±0.0443,P<0.01)達到最小值。肺組織中HIF-1αmRNA(0.020279±0

10、.000625,P<0.01)、iNOSmRNA(0.029780±0.000498,P<0.01)的相對表達量及NO(7.505±0.481,P<0.01)含量24h達到最高值,MDA(6.819±0.810,P<0.01)、MPO(5.089±0.523,P<0.05)含量36h達到峰值。SAP-LI模型組與對照組和假手術(shù)組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。病理組織學(xué)觀察可見肺組織損傷36h最重。肺濕干質(zhì)量比、肺灌洗液蛋白

11、與血清蛋白比值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.717,P<0.01)。肺濕干質(zhì)量比和MPO、MDA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.636,P<0.01;r=-0.497,P<0.01)。MDA和肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0.661,P<0.01)。NO和MPO、MDA、iNOS、HIF-1α、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0.721,P<0.01;r=0.529,P<0.01;r=0.695,P<0.01;r=0.642,P<0.01;

12、r=0.781,P<0.01)。HIF-1α和MPO、iNOS、MDA、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0.387,P<0.01;r=0.99,P<0.01;r=0.269,P<0.05;r=0.413,P<0.01)。iNOS和MPO、MDA、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0.457,P<0.01;r=0.323,P<0.01;r=0.495,P<0.01)。MPO與MDA、肺灌洗液蛋白與血清蛋白比值呈正相關(guān)(r=0

13、.595,P<0.01;r=0.884,P<0.01)。
　　結(jié)論:(1)通過夾閉胰頭部的方法建立了一種新型大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肝損傷的動物模型,24h為肝損傷最嚴(yán)重的時間點,也是我們建模的最佳時間點.為急性壞死性胰腺炎致肝損傷的發(fā)病機制及藥物干預(yù)研究提供了一種較為理想的動物模型。(2)通過夾閉胰頭部的方法建立了一種新型大鼠重癥急性胰腺炎致肺損傷動物模型,36h為肺損傷最嚴(yán)重的時間點,也是我們建模的最佳時間點。為重癥急性胰腺炎

14、致肺損傷的發(fā)病機制及藥物干預(yù)研究提供了一種較為理想的動物模型。(3)大鼠重癥急性胰腺炎繼發(fā)性肺損傷36h損傷最重,肺組織MDA、MPO檢測值36h最高,HIFmRNA、iNOSmRNA含量及NO檢測值24h最高,由此推測HIF-1α參與了肺損傷早期過程,iNOS及NO間接性致傷作用占主導(dǎo)地位。HIF-1α、NO、iNOS與中性粒細(xì)胞活性、脂質(zhì)過氧化程度、及SAP-LI蛋白滲出有關(guān)。中性粒細(xì)胞活性與脂質(zhì)過氧化程度有關(guān)。中性粒細(xì)胞活性、過氧