PS-341治療小鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是臨床常見的危重病,其發(fā)病急,進(jìn)展快,患者早期即可出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory responsesyndrome SIRS),導(dǎo)致遠(yuǎn)離臟器功能不全。急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷(acutepancreatitis associated lung injury,APALI),是SAP早期最常見、最嚴(yán)重的并發(fā)癥。75％的SAP患者早期

2、即可發(fā)生,臨床上表現(xiàn)為急性呼吸窘迫綜合癥,死亡率高達(dá)30～50%。尋找有效的治療藥物,減輕SAP引起的肺損傷和多臟器功能不全,降低SAP的死亡率,一直是臨床研究的熱點(diǎn)。重癥急性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,經(jīng)過(guò)大量的基礎(chǔ)研究,目前較為一致的觀點(diǎn)是:胰蛋白酶在腺泡中異常活化引起胰腺腺泡細(xì)胞損傷,NF-kB活化是胰酶異?；罨淖钪匾氖紕?dòng)機(jī)制;強(qiáng)烈的胰腺局部炎癥反應(yīng)釋放出來(lái)的大量炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征;過(guò)度的全身炎癥反應(yīng),導(dǎo)致遠(yuǎn)離

3、器官損傷和多臟器功能不全。肺部是最早和最常受累及的胰外器官,有研究表明中性粒細(xì)胞滲出、聚集和粘附分子的過(guò)度表達(dá)是重癥急性胰腺炎引起肺損傷的重要原因。因此,如能有效降低粘附分子的表達(dá)和減少中性粒細(xì)胞滲出,則有可能減輕重癥急性胰腺炎引起的肺損傷。PS-341又稱硼替佐米,是目前唯一一個(gè)批準(zhǔn)進(jìn)入臨床的蛋白酶體抑制劑。PS-341能夠特異性抑制26S proteasome活性,使Ⅰ-kBα的降解減少,從而間接抑制了NF-kB活化,使多種炎癥介質(zhì)

4、、細(xì)胞因子及粘附分子的表達(dá)和釋放降低。在急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷的發(fā)病機(jī)制中,NF-kB持續(xù)活化起著關(guān)鍵性作用。因此,用PS-341進(jìn)行治療有可能減輕急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷。本實(shí)驗(yàn)用腹腔內(nèi)注射雨蛙素及脂多糖制作小鼠重癥急性胰腺炎模型,隨機(jī)分為三組:PS-341治療組、模型對(duì)照組和空白對(duì)照組,最后一次注射雨蛙素2小時(shí)后比較各組小鼠間血清淀粉酶、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、乳酸脫氫酶(LDH)、髓過(guò)氧化物酶(MPO)、肺臟病理改變及細(xì)胞粘附分子(

5、ICAM-1、E-selectin、P-selectin)的表達(dá)差異,探討PS-341對(duì)小鼠急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷的治療作用。實(shí)驗(yàn)方法1、動(dòng)物來(lái)源:清潔級(jí)雌性ICR小鼠60只,體重19～21g,由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供。2、采用腹腔內(nèi)注射雨蛙素及脂多糖制作重癥急性胰腺炎模型:造模前12小時(shí),小鼠禁食不禁水。每隔1小時(shí)腹內(nèi)注射雨蛙0.2ml(50ug/kg)共7次,首次注射雨蛙素后5小時(shí)腹腔注射脂多糖10mg/kg。3、實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分

6、三組:PS-341治療組20只、空白對(duì)照組20只、模型對(duì)照組20只模型對(duì)照組:注射脂多糖前1/2小時(shí)腹腔注射50%DMSO0.2ml(0.9%的NS稀釋)空白對(duì)照組:用生理鹽水代替雨蛙素和脂多糖,依照同樣的方法腹腔注射。PS-341治療組:注射脂多糖前1/2小時(shí)腹腔注射PS-341(0.5mg/kg)0.2ml4、小鼠制模后禁食不禁水,觀察2小時(shí)。5、戊巴比妥鈉(50mg/kg)0.2ml腹內(nèi)注射后麻醉,右側(cè)頸靜脈切開取血,提取血清置-

7、20℃冰箱保存;取胰腺及肺組織,一部分用10%福爾馬林溶液固定,一部分置與液氮中,然后-80℃冰箱保存。6、用自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清淀粉酶、CRP、LDH,比較各組水平差異;7、胰腺標(biāo)本制備石蠟切片,常規(guī)HE染色,光鏡下比較各組胰腺和肺損傷情況;8、凍存的肺組織取出測(cè)MPO水平,用RT-PCR方法檢測(cè)標(biāo)本中所含的黏附分子水平(ICAM-1、E-selectin、P-selectin),比較各組差異。結(jié)果1、淀粉酶、CRP和LDH檢測(cè)結(jié)果:模

8、型對(duì)照組淀粉酶、CRP和LDH水平遠(yuǎn)高于空白對(duì)照組(p＜0.01);PS-341治療組淀粉酶、CRP和LDH水平低于模型對(duì)照組(p＜0.05);2、病理改變:肉眼觀察:PS-341治療組:腹腔內(nèi)無(wú)或少量腹水,無(wú)皂化斑,胰腺和肺臟輕至中度水腫;模型對(duì)照組:腹腔內(nèi)有大量腹水,有較多皂化班形成,胰腺?gòu)V泛中重度水腫,局部腺葉出血壞死,肺臟充血明顯,部分肺臟有出血空白對(duì)照組:腹腔內(nèi)無(wú)腹水,無(wú)皂化斑,胰腺僅表現(xiàn)為輕度水腫或基本正常,肺臟無(wú)殊光鏡下觀

9、察結(jié)果:胰腺:PS-341治療組:間質(zhì)增寬;間質(zhì)、腺體間和血管周圍少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)模型對(duì)照組:間質(zhì)明顯增寬,腺葉結(jié)構(gòu)破壞,片狀出血、壞死;間質(zhì)、腺體間和血管周圍有多量炎細(xì)胞浸潤(rùn)空白對(duì)照組:間質(zhì)略增寬,小葉結(jié)構(gòu)完整,無(wú)出血、壞死改變,無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)肺臟:PS-341治療組:間質(zhì)水腫,有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡內(nèi)無(wú)出血,無(wú)透明膜形成模型對(duì)照組:間質(zhì)明顯水腫,微血管周圍有多量炎細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡內(nèi)出血,透明膜可見空白對(duì)照組:間質(zhì)無(wú)水腫,肺泡內(nèi)無(wú)出血,血管

10、周圍極少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)3、MPO水平(肺臟):模型對(duì)照組MPO水平遠(yuǎn)高于空白對(duì)照組(p＜0.05);PS-341治療組MPO水平低于模型對(duì)照組(p＜0.05);4、粘附分子水平(ICAM-1、E-selectin、P-selectin)(肺臟):模型對(duì)照組黏附分子水平高于空白對(duì)照組(p＜0.05);PS-341治療組黏附分子水平低于模型對(duì)照組(p＜0.05);結(jié)論1、PS-341可以降低SAP小鼠血清淀粉酶、CRP和LDH水平。2、PS-