褪黑素抗小鼠胃癌作用及其膜受體機(jī)制研究.pdf

1、胃癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，表現(xiàn)為進(jìn)展快、預(yù)后較差，5年生存率低，嚴(yán)重影響人們的健康和生活水平。褪黑素（melatonin,MLT）是一種主要由松果體分泌的神經(jīng)內(nèi)分泌激素，具有多種生理功能，包括調(diào)節(jié)睡眠/覺醒周期、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)及抗氧化等作用。近年來大量研究表明褪黑素具有很強(qiáng)的抗腫瘤作用，其抗腫瘤作用依賴于抗氧化、免疫刺激及誘導(dǎo)凋亡等特性，褪黑素膜受體MT1、MT2參與介導(dǎo)其抗腫瘤細(xì)胞增殖機(jī)制。目前關(guān)于褪黑素與胃癌、褪黑素膜

2、受體三者之間直接聯(lián)系的研究尚未見公開報(bào)道。本研究旨在探討褪黑素對(duì)小鼠胃癌抑制作用及其與褪黑素膜受體、MAPKs、PI3K-Akt信號(hào)通路的關(guān)系，為探討胃癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制以及尋找胃癌治療的新思路提供一定的理論依據(jù)。
　　1.褪黑素體內(nèi)抗小鼠胃癌作用及其對(duì)褪黑素膜受體MT1、MT2的影響
　　為研究褪黑素體內(nèi)抗小鼠胃癌作用及其與MT1、MT2的關(guān)系，本部分研究應(yīng)用小鼠前胃癌細(xì)胞MFC建立荷胃癌小鼠模型，不同濃度褪黑素干預(yù)后，運(yùn)用實(shí)

3、時(shí)熒光定量RT-PCR、免疫印跡等方法檢測(cè)相關(guān)因子的表達(dá)變化。結(jié)果表明：①褪黑素能夠縮小荷胃癌小鼠的腫瘤體積，減輕腫瘤重量，達(dá)到抗腫瘤作用；②褪黑素在抑制腫瘤生長(zhǎng)過程中下調(diào)腫瘤組織Bcl-2表達(dá)，上調(diào)Bax和p21表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；③褪黑素促進(jìn)腫瘤組織膜受體MT1、MT2表達(dá)，表明褪黑素可能通過膜受體MT1、MT2途徑實(shí)現(xiàn)抗小鼠胃癌生長(zhǎng)的作用。
　　2.褪黑素體外抗小鼠胃癌細(xì)胞增殖作用及其對(duì)褪黑素膜受體

4、MT1、MT2的影響
　　為研究褪黑素體外抗小鼠胃癌細(xì)胞增殖作用及其與褪黑素膜受體 MT1、MT2的關(guān)系，本部分研究建立不同濃度時(shí)間點(diǎn)褪黑素對(duì)小鼠胃癌細(xì)胞MFC干預(yù)模型，流式細(xì)胞術(shù)、CCK-8、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR、免疫印跡等方法檢測(cè)胃癌細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞周期變化，Bcl-2、Bax、p21、MT1與MT2基因及蛋白表達(dá)改變，反義核酸技術(shù)（siRNA）沉默MT2表達(dá)，觀測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響。結(jié)果表明：①CCK-8結(jié)果顯示褪黑

5、素抑制小鼠胃癌細(xì)胞增殖，呈時(shí)間劑量依賴性；②流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示褪黑素抑制小鼠胃癌細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期G1/S期阻滯有關(guān)；③褪黑素在抑制小鼠胃癌細(xì)胞的增殖過程中下調(diào)腫瘤細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)，上調(diào)Bax和p21的表達(dá)；④褪黑素促進(jìn)小鼠胃癌細(xì)胞膜受體MT1、MT2表達(dá)；⑤應(yīng)用siRNA技術(shù)沉默MT2表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)siRNA介導(dǎo)的MT2沉默能明顯拮抗褪黑素對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用，提示褪黑素促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖與褪黑素膜受體MT

6、2有關(guān)。
　　3.MAPKs及PI3K-Akt信號(hào)通路在褪黑素抑制小鼠胃癌細(xì)胞增殖中的作用
　　為研究MAPKs及PI3K-Akt信號(hào)通路在褪黑素抑制胃癌細(xì)胞增殖過程中的作用，本部分研究建立褪黑素在不同時(shí)間點(diǎn)干預(yù)胃癌細(xì)胞的體外模型，免疫印跡法檢測(cè)胃癌細(xì)胞p-ERK/ERK、p-Akt/Akt的表達(dá)，利用siRNA技術(shù)沉默MT2表達(dá)探討MAPKs及PI3K/Akt信號(hào)通路在褪黑素抑制胃癌細(xì)胞增殖中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①褪黑素作用

7、24h后明顯下調(diào)MFC細(xì)胞的ERK1/2、Akt磷酸化，提示褪黑素通過抑制 ERK1/2、Akt的磷酸化從而抑制胃癌細(xì)胞增殖；②沉默MT2可部分阻斷褪黑素抑制 ERK1/2、Akt磷酸化的作用，提示褪黑素可通過MT2受體抑制ERK1/2、Akt的磷酸化從而抑制胃癌細(xì)胞增殖。
　　綜上所述，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)褪黑素能夠抑制小鼠胃癌細(xì)胞增殖，其機(jī)制包括抑制抗凋亡基因Bcl-2表達(dá)、促進(jìn)促凋亡基因Bax表達(dá)、促進(jìn)p21蛋白表達(dá)、上調(diào)MT1、