小柴胡湯及其拆方對小鼠體內(nèi)抗流感病毒作用及其機制研究.pdf

1、目的： 流感病毒可以引起呼吸道感染，發(fā)病急、流行廣泛、傳播迅速，老人、小孩和慢性病患者群體感染易出現(xiàn)并發(fā)癥，且病死率高。由于流感病毒表面抗原能連續(xù)不斷地發(fā)生抗原性漂移和轉(zhuǎn)換，使本來有效的疫苗很快失效，使得流感不斷流行，對人民群眾的身體健康造成極大威脅。流感病毒引發(fā)的呼吸道感染屬于中醫(yī)時行感冒和風溫的范疇?！秱摗分械拿叫〔窈鷾珵楹徒馍訇柕拇矸?。方中以苦辛微寒之柴胡為君，清疏少陽半表之邪，以苦寒之黃芩為臣，清瀉少陽半里之邪，

2、二藥相配共奏和解少陽之功。佐以半夏，生姜和胃降逆止嘔；人參，大棗益氣健脾；炙甘草助參、棗扶正，且調(diào)和諸藥為使。全方寒熱并用，攻補兼施，升降協(xié)調(diào)，有和解少陽，疏利三焦，調(diào)達氣機，宣通內(nèi)外，運轉(zhuǎn)樞機的作用。藥僅七味而配伍精當，組方嚴謹，療效顯著，安全可靠。研究小柴胡湯調(diào)節(jié)免疫機制抗病毒感染的機制，以及各配伍組間的協(xié)同作用機理，對于揭示經(jīng)方配伍治療的科學性和嚴謹性，弘揚祖國傳統(tǒng)醫(yī)藥學，發(fā)掘祖國傳統(tǒng)醫(yī)藥學寶庫，指導臨床治療，都具有重要的意義。

3、 方法： 本實驗通過模擬人類呼吸道病毒感染，復制出呼吸道病毒感染的實驗小鼠模型，將其分為不同組別，以病毒唑作為西藥對照組，通過小柴胡湯全方及柴芩，姜夏，參棗草，柴芩+姜夏，柴芩+參棗草等各拆方的治療，運用免疫學等現(xiàn)代生物科學的先進技術方法，觀察小柴胡湯及其拆方的作用機制，探求小柴胡湯“扶正祛邪”與“和法”的本質(zhì)，尋求配伍的基本規(guī)律。具體方法如下： 1、通過兩次病毒的鼠肺適應過程，再經(jīng)雞胚尿囊腔接種傳代，制備新鮮毒種

4、。 2、測定小鼠體內(nèi)病毒滴度，得到病毒的LD50，以備小鼠體內(nèi)實驗時使用。 3、將小鼠分為9組，經(jīng)造模和治療后，用精密電子秤稱量小鼠體重及肺重，計算肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率，來觀察小柴胡湯及其拆方對流感病毒感染小鼠的保護作用。 4、將小鼠分為9組，經(jīng)造模和治療后，眼球采血，取血清，運用雙抗體夾心ELISA法測定各組小鼠血清中腫瘤壞死因子—α(TNF—α)和白細胞介素-2(IL-2)的表達水平，觀察小柴胡湯及其拆方對流

5、感病毒感染小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)。 結(jié)果： 1、小柴胡湯全方組，柴芩組，柴芩+姜夏組及柴芩+參棗草組的肺指數(shù)與空白對照組比較P＜0.05，表明小柴胡湯及含有柴胡，黃芩的各拆方能降低流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)，表明小柴胡湯及其拆方對流感病毒感染小鼠均有保護作用，且以全方組為最佳。 2、比較不同處理組間的TNF—α的濃度可知：空白對照組明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，提示甲1型流感病毒感染后小鼠體內(nèi)TNF

6、—α釋放增多，可能對機體造成炎性損傷；小柴胡湯全方組，柴芩+參棗草組和參棗草組小鼠血清TNF—α低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示各組可以降低小鼠血清中由于流感病毒感染而升高的TNF—α含量，從而可能減輕炎癥反應；病毒唑組，柴芩組，柴芩+姜夏組和姜夏組小鼠血清TNF—α也有下降，但和模型組比較差異無統(tǒng)計學意義。 3、比較不同處理組間的IL-2的濃度可知：空白對照組小鼠血清IL-2低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義(

7、P＜0.01)，提示甲1型流感病毒可以導致IL-2明顯降低，小鼠免疫功能明顯受到影響；病毒唑組高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；小柴胡湯組，柴芩組，柴芩+姜夏組，柴芩+參棗草組小鼠血清IL-2明顯高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，提示各組對小鼠因流感病毒感染而下降的免疫功能有明顯的提高作用；參棗草組和姜夏組小鼠血清IL-2也有升高，但和模型組比較差異無統(tǒng)計學意義。 結(jié)論： 拆方研究是目前應

8、用于中藥復方組方理論研究的最為常用的方法，運用此研究方式能深入了解中藥復方配伍的規(guī)律。綜合本實驗結(jié)果，小柴胡湯具有明顯的抗流感病毒作用，且能有效防止過激的炎癥反應對機體造成的免疫性損傷，其作用優(yōu)于各拆方；在小柴胡湯方劑中，以柴芩配伍的各組復方抗流感病毒的作用最強，表明在該方劑中，主成分柴胡，黃芩在抗流感病毒感染環(huán)節(jié)中可能起著主要的作用，而人參、大棗、甘草則可能主要起到提高機體免疫力的作用。為小柴胡湯的臨床應用和進一步研究提供了一定的實驗