黃芪甲苷抗甲型流感病毒作用研究.pdf

1、流感是由流感病毒引起的急性呼吸道疾病，具有感染宿主廣泛，傳播迅速，致病率高等特點。甲型流感病毒容易引發(fā)流感大流行，其死亡率高于季節(jié)性流感，對人類和動物的生命健康造成了嚴重的威脅。疫苗是預(yù)防流感的主要策略，但流感病毒的高度變異，疫苗研發(fā)的滯后性以及對不同流感毒株不能產(chǎn)生交叉保護作用等缺陷限制了疫苗的有效使用。目前，臨床上可用的抗流感病毒藥物包括M2離子通道抑制劑（金剛烷胺和金剛乙胺）和神經(jīng)氨酸酶抑制劑（扎那米韋、奧司他韋和帕拉米韋）。M2

2、離子通道抑制劑因多年使用已造成臨床流行毒株對其100％耐藥，神經(jīng)氨酸酶抑制劑的耐藥毒株也在日益增加。疫苗與化藥的缺陷使得流感的防治舉步維艱。因此，迫切需要開發(fā)新型高效廣譜抗流感病毒藥物來應(yīng)對流感疫情。
　　黃芪甲苷（AstragalosideⅣ，AST）為羊毛酯醇型的四環(huán)三萜皂苷，是名貴中藥材黃芪的主要活性成分。大量研究表明，AST具有免疫調(diào)節(jié)、器官保護、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、改善血液流變性等藥理作用。但有關(guān) AST抗流感

3、病毒的研究還未見報道。本文分別以A/PR/8/34(H1N1，PR8)，A/Guangzhou/03/2009（panH1N1和A/Duck/Guangdong/99(H5N1)三種不同流感病毒株感染人肺癌上皮細胞（A549），建立體外流感病毒感染模型，以終點稀釋法測定病毒滴度，評價了 AST的體外抗流感病毒活性。通過建立流感病毒BALB/c小鼠感染模型，以小鼠存活率、體重變化等為指標，評價了AST的體內(nèi)抗流感病毒活性。此外，本文基于P

4、R8毒株細胞感染模型設(shè)計了一系列實驗，初步探索了 AST抗流感病毒活性的作用機制。在不同時間點加藥實驗中，通過熒光定量PCR方法檢測了AST對流感病毒NP mRNA在A549細胞中的表達的影響，以此判斷病毒復(fù)制的哪一階段受到AST抑制；通過血凝抑制、溶血抑制及神經(jīng)氨酸酶活性抑制試驗研究了AST對流感病毒血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的影響，以初步闡述黃芪甲苷的抗流感病毒作用機制。
　　結(jié)果表明，AST在6.25~25μg/mL

5、的濃度范圍對PR8、panH1N1和H5N1毒株在A549細胞中的增殖有顯著的抑制活性，且不易誘導(dǎo)病毒株的耐藥變異；在400μg/m L及其以下濃度AST對A549細胞沒有毒性。30 mg/kg/d的AST皮下注射給藥對感染PR8小鼠具有顯著的生命保護作用，具體表現(xiàn)為顯著提高了感染小鼠的存活率及其平均存活時間，抑制了感染小鼠的體重下降。不同時間點加藥試驗結(jié)果表明，AST在病毒感染細胞后0~2 h內(nèi)給藥顯著抑制流感病毒復(fù)制。然而，血凝抑制