清熱透表方抗流感病毒FM1的作用及其免疫機制.pdf

1、目的：
　　通過觀察清肺透表方對甲型流感病毒FM1感染小鼠的預防治療作用，并以先天性免疫應答中重要的模式識別受體TLR7作為研究靶點，重點探討清熱透表方抗流感病毒的作用機制，為中醫(yī)藥抗流感病毒的理論研究及臨床應用提供重要依據(jù)。
　　方法：
　　1)采用滴鼻法建立流感病毒肺損傷小鼠模型，觀察藥物對流感病毒肺損傷小鼠的死亡保護率及肺指數(shù)，并采用HE染色法觀察小鼠肺組織病理變化，用以評價藥物在小鼠體內(nèi)抗流感病毒的作用。

2、>　　2)采用ELISA法檢測流感病毒肺損傷小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6的含量，用以評價藥物對感染流感病毒后炎性因子的抑制作用。
　　3)采用熒光定量PCR和western-blot技術，檢測流感病毒肺損傷小鼠肺組織中TLR7、MyD88、NF-κB、AP-1mRNA和蛋白表達水平，并評價藥物對感染流感病毒肺組織中以TLR7介導的信號通路的影響。
　　結果：
　　1)與模型組相比，清熱透表方高、中劑量組可

3、以有效降低小鼠死亡率，提高小鼠死亡保護率，改善生存狀況，其差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或P＜0.05），而低劑量組可能因為藥物劑量不足，對小鼠死亡保護作用不明顯;并且清熱透表方各劑量組與模型組相比均可以降低流感病毒小鼠的肺指數(shù)，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01或P＜0.05);鏡下觀提示該方對流感病毒所致病毒性肺損傷有不同程度的改善作用，使得淋巴等炎性細胞減少，浸潤減輕，肺泡壁充血擴張及脫落的上皮細胞減少。
　　2)與模型組相

4、比，清熱透表方各劑量組均可以有效的降低流感病毒小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌水平，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或P＜0.05），說明該方可以有效抑制流感病毒感染后促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6分泌水平，避免因炎性細胞過度表達而引起的免疫損傷，減輕對機體的損害，并且存在一定的量效關系。
　　3)清熱透表方高、中劑量組均可以下調(diào)TLR7、MyD88、NF-κB、AP-1 mRNA及蛋白的表達，與模型組相

5、比差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或P＜0.05)，但清熱透表方低劑量組與模型組相比無顯著差異（P＞0.05），提示該方高、中劑量可以通過下調(diào)TLR7介導的MyD88依賴的信號轉導通路抑制下游炎性細胞因子表達，從而發(fā)揮抗病毒作用。
　　結論：
　　清熱透表方可以有效地抑制甲型流感病毒FM1在小鼠體內(nèi)的增殖，顯著降低促炎因子的釋放，減輕肺組織炎性病理損傷，其抗流感病毒的機制可能為下調(diào)TLR7介導的MyD88依賴的信號轉導通路抑