流感病毒神經(jīng)氨酸酶DNA抗流感病毒保護(hù)性及其酶活性關(guān)鍵序列的解析.pdf

1、 本論文由二部分組成：(1)流感病毒神經(jīng)氨酸酶DNA抗流感病毒保護(hù)性的序列解析；(2)神經(jīng)氨酸酶酶活性關(guān)鍵序列分析。神經(jīng)氨酸酶(Neuraminidase,NA)是流感病毒表面主要糖蛋白之一。我們以前的研究表明NA-DNA在小鼠模型上誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)可以對(duì)同種病毒的攻擊提供完全保護(hù)，并可對(duì)同亞型不同病毒株的攻擊提供交叉保護(hù)。通過PCR的方法構(gòu)建一系列從A/PR/8/34(H1N1)NA的5’端或3’端連續(xù)缺失的截短N(yùn)A質(zhì)粒，采用初次

2、免疫后間隔三周以同樣劑量加強(qiáng)免疫的方法將這些質(zhì)粒免疫BALB/C小鼠。在加強(qiáng)免疫后一周，用致死量的病毒攻擊小鼠。通過觀察小鼠的存活率和檢測(cè)血清中抗NA抗體的效價(jià)以及肺部病毒量來尋找NA抗流感病毒的關(guān)鍵序列。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著NADNA從5’端或3’端連續(xù)缺失的核苷酸數(shù)目增多，NA-DNA誘導(dǎo)的抗體效價(jià)下降。NADNA從5’端連續(xù)缺失至60個(gè)核苷酸，或從3’端連續(xù)缺失至66個(gè)核苷酸，NA-DNA就失去保護(hù)作用。因而，NADNA的nt58-

3、nt1299片段在NA-DNA抗流感病毒中起重要作用?！　A具有酶活性。在流感病毒生活周期中，新合成的子代病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)能夠識(shí)別鄰近病毒的N-乙酰神經(jīng)氨酸殘基并與之結(jié)合，使子代病毒自我聚集，無法釋放。NA能夠切斷病毒表面的神經(jīng)氨酸殘基，抑制子代病毒的自我聚集，利于病毒釋放。在小鼠模型上NA-DNA誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體能夠抑制流感病毒NA的活性。用PCR方法構(gòu)建一系列從A/PR/8/34(H1N1)NA的5’