大彈涂魚(yú)褪黑素受體的研究.pdf

1、大彈涂魚(yú)(Boleophthalmus pectinirostris)生活于潮間帶灘涂，營(yíng)洞穴生活，是我國(guó)東南沿海的名特優(yōu)養(yǎng)殖魚(yú)類。前期的研究結(jié)果表明，繁殖季節(jié)大彈涂魚(yú)生殖群體呈現(xiàn)出有規(guī)律的半月周期產(chǎn)卵現(xiàn)象，血清中的類固醇激素和褪黑素也呈明顯的半月周期變化。為了進(jìn)一步了解大彈涂魚(yú)褪黑素和半月周期產(chǎn)卵習(xí)性的關(guān)系，本文采用分子生物學(xué)等方法克隆了大彈涂魚(yú)四種褪黑素受體亞型基因（mtnr1a1.4、mtnr1a1.7、mtnr1b和mtnr1c

2、），并研究了其在不同組織的表達(dá)。主要結(jié)果如下:
　　 1.mtnr1a1.4基因的部分片段長(zhǎng)度為1471 bp，蛋白質(zhì)編碼區(qū)可編碼246個(gè)氨基酸，其中3'-UTR為728 bp; mtnr1a1.7基因全長(zhǎng)為1501 bp，編碼一個(gè)由351個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，5'端有一個(gè)310 bp的非編碼區(qū)，3'端有一個(gè)138 bp的非編碼區(qū);mtnr1b基因全長(zhǎng)為2074 bp，有一個(gè)長(zhǎng)1203 bp的開(kāi)放閱讀框，5'端有一個(gè)787 bp

3、的非編碼區(qū)，3'端有一個(gè)84 bp的非編碼區(qū)，編碼一個(gè)由400個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì);mtnr1c基因全長(zhǎng)為1615 bp，有一個(gè)長(zhǎng)1080 bp的開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)由359個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，5'端有一個(gè)260 bp的非編碼區(qū)，3'端有一個(gè)275 bp的非編碼區(qū)。
　　 2.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示，四種受體亞型均是具有七次跨膜區(qū)的G蛋白偶聯(lián)受體;對(duì)已知的脊椎動(dòng)物褪黑素受體亞型建樹(shù)分析進(jìn)一步證實(shí)，從大彈涂魚(yú)克隆所得的四個(gè)受體亞型分

4、別屬于Mtnr1a1.4，Mtnr1a1.7，Mtnr1b和Mtnr1c亞型。
　　 3.采用實(shí)時(shí)熒光定量方法分析，結(jié)果顯示褪黑素受體的四個(gè)亞型廣泛分布于大彈涂魚(yú)成魚(yú)的不同組織。在腦組織和視網(wǎng)膜，褪黑素受體基因的表達(dá)量顯著高于其它組織，并且在視頂蓋和中腦區(qū)域具有最高的表達(dá)量。在大彈涂魚(yú)雌魚(yú)的HPG軸中，四種褪黑素受體亞型在間腦和垂體均有分布，而在卵巢組織，只有mtnr1a1.4，mtnr1a1.7和mtnr1b表達(dá)。
　　

5、 4.繁殖季節(jié)大彈涂魚(yú)腦組織中的aanat2基因，間腦的mtnr1a1.4基因，以及卵巢中的mtnr1a1.7基因具有明顯的半月周期變化節(jié)律，即1個(gè)月有2個(gè)周期，每個(gè)周期均出現(xiàn)1個(gè)峰值。第1個(gè)峰值出現(xiàn)在上弦月附近，第2次峰值出現(xiàn)在下弦月附近，并且峰值出現(xiàn)的時(shí)間與大彈涂魚(yú)產(chǎn)卵時(shí)間一致。大彈涂魚(yú)發(fā)育成熟的卵母細(xì)胞中，在完全分離的濾泡膜和卵細(xì)胞上僅檢測(cè)到mtnr1a1.7基因的表達(dá)。
　　 5.夜間大彈涂魚(yú)腦組織褪黑素受體亞型mtn

6、r1a1.4的表達(dá)量顯著高于白天，但是在視網(wǎng)膜組織沒(méi)有觀察到mtnr1a1.4基因有明顯的周日變化。而腦組織和視網(wǎng)膜中的mtnr1a1.7和mtnr1b兩個(gè)基因，其周日表達(dá)量均呈現(xiàn)出下午顯著高于夜間和早上。mtnr1c基因在腦組織的周日表達(dá)具有兩個(gè)峰值，分別出現(xiàn)在凌晨3點(diǎn)和白天12點(diǎn);而視網(wǎng)膜中mtnr1c則無(wú)明顯的周日表達(dá)變化。
　　 綜上所述表明，褪黑素及其受體可能是大彈涂魚(yú)半月周期產(chǎn)卵節(jié)律的關(guān)鍵因子，它通過(guò)作用于HPG軸或