哮喘大鼠血清褪黑素及海馬褪黑素受體1的變化.pdf

1、目的：檢測(cè)哮喘大鼠血清褪黑素水平及海馬組織褪黑素受體1(Melatonin Receptor1,MT1)表達(dá)的變化,并探討其在哮喘發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的的作用和可能的神經(jīng)保護(hù)及神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：60只健康SD大鼠按隨機(jī)原則分為對(duì)照組(20只)、哮喘組(40只)。其中,對(duì)照組隨機(jī)分為2組,每組10只,均于建模第17天取材,10只用于免疫印跡、逆轉(zhuǎn)錄PCR及血清褪黑素檢測(cè),10只用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)。哮喘組隨機(jī)分4組,每組10只

2、:分別用于建模第5天、10天、17天取材以行免疫印跡、RT-PCR及血清褪黑素檢查的三組(Day5,Day10,Day17),及于第17天取材行免疫組織化學(xué)檢測(cè)的一組。通過(guò)卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏、激發(fā),建立哮喘大鼠模型,采用ELISA方法測(cè)定血清褪黑素水平的變化,應(yīng)用免疫組織化學(xué)法、RT-PCR及蛋白免疫印跡技術(shù),檢測(cè)不同時(shí)期哮喘組及對(duì)照組大鼠海馬組織MT1的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.成功復(fù)制哮喘大鼠模型,大鼠哮喘

3、發(fā)作時(shí)呼吸急促,煩躁不安,腹肌收縮和跌倒,可聞及喉間喘鳴音;對(duì)照組大鼠無(wú)明顯上述表現(xiàn)。
　　2.通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè),哮喘組大鼠外周褪黑素水平較對(duì)照組顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在哮喘組中,與哮喘第5及10天比較,第17天大鼠血清褪黑素濃度明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而哮喘組第5天與第10天間褪黑素濃度無(wú)顯著差異,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.通過(guò)免疫組化檢測(cè),哮喘組與對(duì)照組大

4、鼠海馬組織中MT1表達(dá)均成陽(yáng)性,哮喘組MT1表達(dá)較對(duì)照組明顯增強(qiáng)。CA1-CA3中MT1陽(yáng)性的細(xì)胞主要集中于三角形胞體中;齒狀回中MT1陽(yáng)性的細(xì)胞多位于顆粒層下方的多形細(xì)胞層,多位于橢圓形或雙極性的胞體。
　　4.通過(guò)RT-PCR及Western Blots技術(shù)檢測(cè),與對(duì)照組比較,哮喘組大鼠海馬組織MT1基因和蛋白水平的表達(dá)均明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在哮喘組中,與哮喘第5及10天比較,第17天大鼠海馬組織MT1