松果體及褪黑素對大鼠胸腺trkB表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究松果體摘除及補(bǔ)充褪黑素對大鼠胸腺trkB表達(dá)的影響，探討褪黑素阻止大鼠胸腺細(xì)胞凋亡是否通過調(diào)節(jié)trkB起作用；進(jìn)一步了解松果體及褪黑素對trkB的影響是通過胸腺細(xì)胞直接起作用還是巨噬細(xì)胞間接起作用，或是二者共同作用。從而豐富神經(jīng)一內(nèi)分泌一免疫網(wǎng)絡(luò)學(xué)說。 方法：①建立松果體摘除動物模型：選用2月齡雄性清潔級SD大鼠110只，分為正常對照組、假手術(shù)對照組、松果體摘除組、松果體摘除+褪黑素腹腔注射7．5mg·kg-I·day

2、-I組和松果體摘除+褪黑素腹腔注射15mg·kg-I．day-1組，術(shù)后4、8周取材，松果體摘除組動物腹腔注射等量生理鹽水。②應(yīng)用RT-PCR方法及凝膠成像分析系統(tǒng)觀察分析松果體摘除及補(bǔ)充外源性褪黑素后胸腺trkBmRNA量的變化；③應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法和圖像分析軟件觀察分析松果體摘除及補(bǔ)充外源性褪黑素后胸腺trkB陽性細(xì)胞的變化；④應(yīng)用trkB和EDl免疫熒光雙標(biāo)染色和共聚焦激光掃描顯微鏡觀察并分析松果體摘除及補(bǔ)充外源性褪黑素后胸腺

3、雙陽性細(xì)胞的變化。 結(jié)果：①與正常組、假手術(shù)對照組相比，松果體摘除后大鼠胸腺半定量RT-PCR的結(jié)果示trkBmRNA明顯降低，提示松果體摘除后胸腺trkBmRNA的表達(dá)減弱，補(bǔ)充褪黑素后有所恢復(fù)，術(shù)后8周時高劑量組大鼠胸腺trkBmRNA的表達(dá)與正常對照組無明顯差異；②與正常組、假手術(shù)對照組相比，松果體摘除后大鼠胸腺trkB免疫組化的結(jié)果顯示陽性細(xì)胞數(shù)降低、陽性面積減少，提示松果體摘除后胸腺trkB的蛋白水平表達(dá)減弱，松果體摘

4、除大鼠補(bǔ)充褪黑素后，胸腺trkB陽性細(xì)胞數(shù)呈時間依賴性恢復(fù)，術(shù)后8周低劑量組恢復(fù)正常，而trkB陽性面積在松果體摘除術(shù)后4周低劑量組就恢復(fù)正常。各組平均灰度無明顯差異；③與正常組、假手術(shù)對照組相比，松果體摘除術(shù)后4周胸腺trkB與EDl免疫熒光雙標(biāo)染色結(jié)果顯示雙陽性細(xì)胞數(shù)降低、陽性面積減少，提示松果體摘除后胸腺trkB+ED1+巨噬細(xì)胞表達(dá)減弱，補(bǔ)充褪黑素后無變化，無論低、高劑量組均無法恢復(fù)正常。術(shù)后8周松果體摘除組與對照組相比上述指標(biāo)

5、均無明顯差異，而低劑量組雙陽性細(xì)胞表達(dá)異常增高，高劑量組恢復(fù)正常。各組平均灰度無明顯差異。 結(jié)論：松果體及褪黑素在影響胸腺細(xì)胞分化發(fā)育過程中，胸腺表達(dá)的trkB隨之發(fā)生變化，松果體摘除導(dǎo)致大鼠胸腺表達(dá)總的trkB合成和釋放減少，而補(bǔ)充外源性褪黑素后能逆轉(zhuǎn)上述異常。其間胸腺巨噬細(xì)胞表達(dá)的trkB也受松果體及褪黑素影響，其與胸腺細(xì)胞表達(dá)的trkB共同作用參與胸腺細(xì)胞分化發(fā)育。胸腺神經(jīng)內(nèi)分泌微環(huán)境的分泌調(diào)節(jié)是松果體及褪黑素保護(hù)胸腺細(xì)胞