松果體及其褪黑素對(duì)大鼠胸腺上皮細(xì)胞IL-7表達(dá)的影響.pdf

1、目的 通過研究松果體摘除和補(bǔ)充褪黑素，以及體外褪黑素干預(yù)對(duì)大鼠胸腺上皮細(xì)胞表達(dá)IL-7的影響，探索松果體褪黑素影響胸腺細(xì)胞分化發(fā)育的機(jī)制，進(jìn)一步揭示松果體褪黑素與胸腺的關(guān)系，從而豐富人類對(duì)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的認(rèn)識(shí)。 方法 ①消化法原代培養(yǎng)大鼠胸腺基質(zhì)細(xì)胞，差數(shù)貼壁和差別消化法純化出胸腺上皮細(xì)胞，應(yīng)用廣譜角蛋白抗體做免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行鑒定； ②運(yùn)用MTT法觀察褪黑素干預(yù)對(duì)體外培養(yǎng)胸腺上皮細(xì)胞生長的影響

2、，半定量RT-PCR法觀察胸腺上皮細(xì)胞經(jīng)褪黑素干預(yù)后IL-7mRNA表達(dá)的變化； ③建立松果體摘除動(dòng)物模型：選用2月齡雄性清潔級(jí)SD大鼠110只，分為正常對(duì)照組、假手術(shù)對(duì)照組、松果體摘除組、松果體摘除+褪黑素腹腔注射7．5mg·kg-1·day-1組和松果體摘除+褪黑素腹腔注射15mg．kg-1·day-1組，松果體摘除組動(dòng)物腹腔注射等量生理鹽水，術(shù)后4、8周取材。 ④運(yùn)用免疫組織化學(xué)法和半定量RT-PCR法觀察松果體摘

3、除及補(bǔ)充褪黑素后，大鼠胸腺上皮細(xì)胞IL-7表達(dá)的變化。 結(jié)果 ①體外培養(yǎng)和純化的胸腺基質(zhì)細(xì)胞經(jīng)鑒定證明90％以上為胸腺上皮細(xì)胞； ②褪黑素干預(yù)對(duì)大鼠胸腺上皮細(xì)胞的生長沒有顯著影響，但能使IL-7mRNA的表達(dá)水平明顯升高，且呈劑量依賴性； ③松果體摘除后大鼠胸腺IL-7免疫組化和RT-PCR的結(jié)果與假手術(shù)對(duì)照組相比無顯著差別； ④與對(duì)照組相比，松果體摘除大鼠補(bǔ)充高劑量褪黑素4W后，免疫組化結(jié)果顯示