褪黑素對大鼠胸腺細胞凋亡及線粒體途徑凋亡調(diào)控蛋白的影響.pdf

1、目的： 通過研究體外培養(yǎng)大鼠胸腺細胞的自然凋亡和褪黑素對其凋亡的影響及機制，探索褪黑素影響胸腺細胞凋亡的機制，進一步揭示褪黑素與胸腺發(fā)育及細胞免疫之間的關系，從而豐富對神經(jīng)一內(nèi)分泌一免疫網(wǎng)絡的認識。 方法： ①體外培養(yǎng)大鼠胸腺細胞，分為空白對照組(Ctrl)和褪黑素干預組M1、M2、M3、M4、M5(藥物濃度分別為10-3、10-4、10-6、10-8、10-10mol/L)。 ②在培養(yǎng)的第4、8小時以A

2、rlnexin-V/PI雙標法染色及流式細胞儀檢測，觀察不同濃度褪黑素干預下胸腺細胞凋亡率的變化。 ③用RT-PCR法及凝膠成像分析系統(tǒng)觀察分析培養(yǎng)的第4、8小時，不同濃度褪黑素干預下胸腺細胞Bax、Bcl-x1、Bim mRNA量的變化。 ④運用western blot法觀察培養(yǎng)的第4、8小時，不同濃度褪黑素干預下胸腺細胞Bax、Bcl-x1和Bim蛋白表達量的變化。 結(jié)果: ①流式細胞檢測結(jié)果顯示，培

3、養(yǎng)4小時，F(xiàn)ITC+/PI的大鼠胸腺細胞高于8小時，相同培養(yǎng)時間的M1、M2、M3組FITC+/PI細胞明顯下降。 ②半定量PT-PCR及Western blot結(jié)果顯示，Bax和Bim的表達隨時間延長而增高，mRNA與蛋白水平一致，但對照組與褪黑素干預組之間無明顯差異；相同培養(yǎng)時間的M1、M2、M3組與對照組相比，Bcl-x1mRNA與蛋白水平均出現(xiàn)升高，但同一處理組的4小時與8小時比較無明顯變化。 結(jié)論: 體