HIBD新生大鼠松果體和HIE新生兒外周血淋巴細(xì)胞鐘基因表達(dá)的變化.pdf

1、研究背景：新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE)是指圍產(chǎn)期缺氧缺血所致的腦損傷，是導(dǎo)致新生兒死亡和發(fā)生后遺癥的重要原因之一。而且存活者也有可能表現(xiàn)出精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育障礙、睡眠-覺(jué)醒周期紊亂等生物節(jié)律異常，嚴(yán)重影響患兒的生存質(zhì)量。 在哺乳動(dòng)物，生物節(jié)律的中央起搏點(diǎn)位于下丘腦視交叉上核( suprachiasmaticnuclei，SCN)。外周血淋巴細(xì)胞、松果體、肝、腎上腺、心臟

2、等外周器官也存在一套鐘振蕩器，為外周生物鐘，它與中樞振蕩器分子組成相似；都是由一組晝夜節(jié)律基因及其編碼的蛋白組成，是維持內(nèi)源性生物鐘運(yùn)行的必要元件。在哺乳類(lèi)生物節(jié)律的分子調(diào)節(jié)機(jī)制中Clock基因、Brnall基因及其表達(dá)產(chǎn)物CLOCK蛋白、BMAL1蛋白可直接影響下游基因的轉(zhuǎn)錄。因此CLOCK和BMAL1在生物體晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)、維持中具有重要的作用，處于核心地位。 哺乳動(dòng)物的松果體不僅表現(xiàn)內(nèi)分泌輸出效應(yīng)，而且自身也起到外周晝夜節(jié)

3、律振蕩器的作用，被認(rèn)為是晝夜節(jié)律的神經(jīng)內(nèi)分泌轉(zhuǎn)換器。其分泌、釋放的褪黑素以組織細(xì)胞間化學(xué)信使的形式，對(duì)SCN和外周生物節(jié)律進(jìn)行晝夜動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)。因此，SCN和松果體之間相互聯(lián)系，共同形成核心生物鐘，發(fā)揮晝夜節(jié)律整體振蕩作用。 目的：比較缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)模型組與對(duì)照組的新生大鼠松果體中CLOCK、BMAL1蛋白合成水平以及缺氧缺血性腦病新生兒與正常新生兒外周血淋巴

4、細(xì)胞(peripheral blood lymphocytes cell，PBLC)中ClockmRNA、Bmall mRNA表達(dá)的變化，探討鐘基因表達(dá)異常在缺氧缺血性腦損傷導(dǎo)致的晝夜節(jié)律紊亂中的作用。 方法： 本研究分成動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究?jī)纱蟛糠帧?在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，選用72只7日齡新生SD大鼠，隨機(jī)分為二組(HIBD模型組與假手術(shù)組，每組36只)。HIBD模型按改良Levine法建立。用Western Blot

5、方法測(cè)定缺氧缺血后0、2、12、24、36、48小時(shí)新生大鼠松果體中CLOCK、BMAL1蛋白合成水平。 在臨床部分，用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcriptase PolymeraseChain Reaction，RT-PCR)測(cè)定18例HIE新生兒與18例正常新生兒PBLC中ClockmRNA、Bmall mRNA的表達(dá)水平，并比較各組之間的差異。 結(jié)果：1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：①新生大鼠HIBD模

6、型組松果體的CLOCK及BMAL1蛋白的表達(dá)水平在HIBD后48小時(shí)高于假手術(shù)組(P＜0.05)，0小時(shí)、2小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)與假手術(shù)組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＞0.05)；②新生大鼠松果體的鐘基因蛋白CLOCK和BMAL1的變化趨勢(shì)基本一致。 2.在臨床研究部分：①HIE新生兒組PBLC中Clock mRNA和Bmall mRNA的表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P＜0.05)；②HIE組PBLC中Clock mRN

7、A、Bmall mRNA表達(dá)水平的變化趨勢(shì)基本一致。 3.HIBD新生大鼠松果體中CLOCK及BMAL1蛋白的含量變化與HIE新生兒PBLC中Clock mRNA和Bmall mRNA表達(dá)水平的變化似乎呈相反趨勢(shì)。 結(jié)論：缺氧缺血性腦損傷對(duì)新生大鼠松果體中CLOCK和BMAL1蛋白合成在損傷早期影響不明顯，但在48小時(shí)有顯著升高；并在HIE新生兒外周血淋巴細(xì)胞中Clock mRNA、Bmall mRNA也出現(xiàn)明顯變化，兩