褪黑素干預(yù)大鼠胰腺炎線粒體膜電位及Caspase3的變化研究.pdf

1、目的：觀察大鼠急性重癥胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)胰腺組織損傷時(shí)腺泡細(xì)胞線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential，△ψm)及caspase3表達(dá)的變化，探討褪黑素(melatonin，MT)對(duì)大鼠急性重癥胰腺炎胰腺損傷的保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 1．取雄性SD大鼠48只，采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為假手術(shù)組(SO)、急性重癥胰腺炎組(SAP

2、)、褪黑素干預(yù)組(MT)。采取經(jīng)胰管注射4％牛黃膽酸鈉法制造大鼠重癥胰腺炎模型，假手術(shù)僅開腹后翻動(dòng)腸管，手術(shù)后每只大鼠皮下補(bǔ)充生理鹽水2ml。
　　 2．造模成功后，分別于4h、10h時(shí)處死大鼠，各組各時(shí)點(diǎn)8只。于大鼠下腔靜脈抽取6-8ml靜脈血，2500rpm/min離心后留取上層血清，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。取新鮮胰腺組織，一部分固定于4％多聚甲醛液中，待行組織病理學(xué)檢測；一部分置凍存管中于液氮中保存，進(jìn)行realtime-

3、PCR檢測；另一部分新鮮組織進(jìn)行體外消化為單細(xì)胞懸液，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。
　　 3．人工碘比色法檢測血清淀粉酶(AMY)含量。
　　 4．蘇木精-伊紅染色觀察胰腺病理變化，常規(guī)行病理學(xué)評(píng)分，流式細(xì)胞術(shù)檢測不同時(shí)間段腺泡細(xì)胞線粒體膜電位變化，Realtime-PCR檢測caspase3的表達(dá)。
　　 5．計(jì)量資料以(x±s)表示，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析、完全隨機(jī)設(shè)計(jì)

4、單因素方差分析，結(jié)果以p＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
　　 結(jié)果：成功建立大鼠SAP模型。
　　 1．血清淀粉酶
　　 同SO組比較，MT組與SAP組血清淀粉酶增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型制作成功；MT組血清淀粉酶各時(shí)點(diǎn)較SAP組相應(yīng)時(shí)點(diǎn)均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 2．胰腺組織病理
　　 同SO組相比，MT組和SAP組胰腺組織均顯示不同程度的病理損害。同SAP組相比

5、，MT組胰腺組織病理損傷較SAP組相應(yīng)時(shí)點(diǎn)減輕。
　　 3．線粒體膜電位
　　 同SO組相比，SAP組急性重癥胰腺炎誘導(dǎo)后4h、10h線粒體膜電位明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同SAP組相比，MT組4h、10h線粒體膜電位明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4．caspase3mRNA表達(dá)
　　 與SO組相比，SAP組急性重癥胰腺炎誘導(dǎo)4h、10h后caspase3mRNA相