EGFR酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼聯(lián)合芳香化酶抑制劑阿那曲唑?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究發(fā)現(xiàn)，表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）信號(hào)通路和雌激素受體（ER）信號(hào)通路都與腫瘤的生物學(xué)行為有密切聯(lián)系，且兩通路還存在信號(hào)交互作用，對(duì)非小細(xì)胞肺癌的生物學(xué)行為有重要影響。故在肺癌治療中，ER和EGFR兩條通路的雙重抑制可能具有協(xié)同抗腫瘤作用。我們前期工作已用Real-time PCR 以及Western blot的方法從非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549、H460、SPC-A-1、H1299中篩檢出ER（ER-α, ER-β）表達(dá)水平最

2、高的細(xì)胞株A549。在此基礎(chǔ)上，本研究旨在探討EGFR酪氨酸激酶抑制劑（吉非替尼）聯(lián)合芳香化酶抑制劑（阿那曲唑）作用于肺腺癌細(xì)胞株A549后，對(duì)其細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期分布以及相關(guān)信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平的影響，并探討其相應(yīng)的分子機(jī)制，為靶向治療聯(lián)合內(nèi)分泌治療在非小細(xì)胞肺癌領(lǐng)域中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：采用免疫組化方法驗(yàn)證A549細(xì)胞株的ER（ER-α，ER-β）以及EGFR的表達(dá)水平，并進(jìn)行細(xì)胞定位。然后將阿那曲唑

3、、吉非替尼單獨(dú)或聯(lián)合作用于A549細(xì)胞株24小時(shí),48小時(shí),72小時(shí)后，用倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖抑制情況，PI單染分析各組細(xì)胞周期分布情況，Annexin V/PI雙染檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況。Western blot檢測(cè)兩種藥物對(duì)EGFR信號(hào)通路中EGFR，ERK，AKT表達(dá)水平以及EGFR，ERK，AKT磷酸化水平的影響。
　　 結(jié)果：肺腺癌細(xì)胞株A549存在ER（ER-α，ER-β）以

4、及EGFR表達(dá)，ER-α主要在細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)。ER-β主要在細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)，少量在細(xì)胞核中表達(dá)。EGFR主要在胞膜和胞漿中表達(dá)。單藥阿那曲唑與單藥吉非替尼對(duì)A549細(xì)胞的作用均呈時(shí)間及濃度依賴性。作用24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)后，與阿那曲唑或吉非替尼單獨(dú)作用相比，兩藥聯(lián)合可以增加A549細(xì)胞的增殖抑制率（P<0.05）及細(xì)胞的凋亡比例（P<0.05）。細(xì)胞周期檢測(cè)提示與兩藥單獨(dú)作用相比，兩藥聯(lián)合可以將更多的細(xì)胞阻滯在GO/G1期（P<0.