和厚樸酚聯(lián)合硼替佐米對(duì)骨髓瘤KM3細(xì)胞增殖和凋亡的影響及作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma MM)是一種漿細(xì)胞惡性克隆性增生性疾病，臨床上以骨痛、溶骨性病變、病理性骨折和貧血為其主要特征，迄今為止仍然是不可治愈的。盡管新的治療藥物硼替佐米、沙利度胺和雷利度胺的應(yīng)用，在很大程度上能改善多發(fā)性骨髓瘤患者的預(yù)后，但大多數(shù)患者都因耐藥而復(fù)發(fā)，因此，需要探索多發(fā)性骨髓瘤新的治療途徑。和厚樸酚(honokiol HNK)是從厚樸中分離出來的具有生物活性的化合物，在治療發(fā)熱、神經(jīng)系統(tǒng)紊亂

2、和胃腸道功能紊亂等方面有好的療效。近年來和厚樸酚的抗腫瘤作用受到國內(nèi)外關(guān)注，它能夠抑制腫瘤細(xì)胞生長，誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡，與傳統(tǒng)的化療藥物具有協(xié)同抗腫瘤活性。
　　 目的：研究和厚樸酚及硼替佐米對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤KM3細(xì)胞增殖的影響及誘導(dǎo)凋亡的作用，觀察和厚樸酚對(duì)KM3細(xì)胞凋亡相關(guān)基因及蛋白表達(dá)水平的影響，進(jìn)一步探討和厚樸酚誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(A組)，實(shí)驗(yàn)組分為HNK單藥組（藥物

3、濃度為4、6、8、10、12、15μg/mL分別是B、C、D、E、F、G組）、Bortezomib單藥組（藥物濃度為5、10、20ng/mL分別是H、I、J組）及二者聯(lián)合用藥組（HNK4μg/mL+Bortezomib5ng/mL,K組；HNK4μg/mL+Bortezomib10ng/mL,L組；HNK4μg/mL+Bortezomib20ng/mL，M組）。在不同的時(shí)間(24、48、72h)采用MTT比色法檢測對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖

4、活性；采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡的變化及和厚樸酚對(duì)細(xì)胞周期的影響；采用Caspase分光光度計(jì)法檢測和厚樸酚對(duì)細(xì)胞內(nèi)caspase-3和caspase-9酶活性的影響；用RT-PCR檢測和厚樸酚對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bax、bcl-2、caspase-3和caspase-9mRNA表達(dá)量的影響：采用Western blot檢測和厚樸酚對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白bax、bcl-2、caspase-3和caspase-9的影響。

5、
　　 結(jié)果：和厚樸酚4-15μg/mL對(duì)KM3細(xì)胞作用24、48、72h的細(xì)胞增殖抑制率分別由20.38％升至80.54％、27.45％升至89.99％、44.94％升至90.91％，不同組、不同作用時(shí)間相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。H組、I組、J組KM3細(xì)胞48h的細(xì)胞增殖抑制率分別是13.13％、36.22％、53.99％，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。K組、L組、M組作用48h的細(xì)胞增殖抑制率分別是

6、52.68％、69.99％、78.53％，聯(lián)合用藥組與單藥組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。流式結(jié)果顯示B組、C組、E組作用于KM3細(xì)胞24h和48h后細(xì)胞凋亡率分別是6.92％、16.15％、60.70％和18.84％、37.21％、86.07％，同一時(shí)間不同實(shí)驗(yàn)組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。H組、I組作用于KM3細(xì)胞24、48h的細(xì)胞凋亡率分別是9.27％、17.87％和11.92％、53.51％，同一時(shí)間不同實(shí)驗(yàn)

7、組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。K組、L組作用于KM3細(xì)胞24、48h，細(xì)胞凋亡率分別是15.75％、22.18％和35.96％、74.70％，K組、L組細(xì)胞凋亡率明顯高于H組、1組，聯(lián)合用藥組和單藥組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示對(duì)照組處于G0/G1期、S期細(xì)胞分別是27.25％、71.67％，而C組處于G0/G1期、S期細(xì)胞分別是48.13％、48.13％，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

8、p＜0.05)。Caspase分光光度計(jì)活性檢測結(jié)果顯示隨著和厚樸酚濃度的增加caspase-3、caspase-9酶活性增加。RT-PCR檢測結(jié)果顯示對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組之間細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bax、bcl-2、caspase-3和caspase-9mRNA表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。Western blot檢測結(jié)果顯示對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組之間bax蛋白表達(dá)量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組Mcl-1蛋白表達(dá)降低，差異有