VPO1對NO氧化作用及機制初步研究.pdf

1、目的:從生化實驗和細胞實驗水平，運用分子生物學技術(shù)，探討VPO1對NO的氧化機制及VPO1在內(nèi)皮細胞NO代謝中的作用。
　　 方法:實驗分為三部分:(1)體外實驗:用探針法實時監(jiān)測VPO1與NO的反應，以及Cl-或Br-對該反應的影響，并用Griess試劑檢測該反應的氧化產(chǎn)物。(2)用NO分析儀檢測GJ-4細胞（穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了VPO1的HEK293細胞）內(nèi)的NO水平，并通過APF熒光檢測法檢測細胞內(nèi)VPO1的活性。(3)通過West

2、ern Blot檢測各種血管活性物質(zhì)刺激后內(nèi)皮細胞VPO1，Nox-4，iNOS的蛋白表達情況，以及內(nèi)皮細胞中的NO含量。
　　 結(jié)果:(1)體外實驗發(fā)現(xiàn)VPO1能與NO發(fā)生反應，氧化產(chǎn)物之一為硝酸鹽;Cl-和Br-能競爭性抑制MPO對NO的消耗，而Cl-對VPO1與NO反應無明顯影響。(2) GJ-4細胞中的NO含量明顯低于對照組，而VPO1的活性明顯高于對照組。(3) LPS(100 ng/ml)和TNF-a(2 ng/ml