貓爪草多糖抗腫瘤機(jī)制及抗氧化作用的研究.pdf

1、[目的]
　　 從小毛莨的塊根貓爪草中提取多糖,并研究貓爪草多糖(Polysaccharide ofRadix Ranunculi Ternati,RTP)對(duì)人肺癌A549細(xì)胞及人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞的凋亡作用及其作用機(jī)制,以及貓爪草多糖的抗氧化活性,探討其在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中應(yīng)用的可能性,為進(jìn)一步深入研究貓爪草多糖的抗腫瘤、抗氧化作用和臨床應(yīng)用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 [方法]
　　 1.應(yīng)用MTT法研究RTP

2、體外對(duì)人肺癌A549細(xì)胞及人鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞增殖的影響。
　　 2.應(yīng)用Hoechst熒光染色法、碘化丙啶(Propidium iodide,PI)單染法分別檢測RTP對(duì)人肺癌A549細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞周期變化的影響。
　　 3.通過RT-PCR方法檢測RTP對(duì)人肺癌A549細(xì)胞凋亡相關(guān)基因p53、Bcl-2、Bax基因mRNA表達(dá)水平的影響。
　　 4.建立小鼠急性肝損傷模型,研究RTP對(duì)肝損傷小鼠血清ALT

3、、AST,臟器T-AOC、SOD活性及MDA含量和肝臟病理組織的影響。
　　 5.建立小鼠D-半乳糖(D-galactose,D-gal)亞急性衰老模型,研究RTP對(duì)D-gal衰老小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和脾細(xì)胞細(xì)胞周期,肝臟IL-2、TNF-α含量,臟器T-AOC、SOD活性及MDA含量,血清NO、NOS的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.RTP在100μg/ml～800μg/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)人肺癌A549細(xì)胞及人

4、鼻咽癌CNE-2Z細(xì)胞均有不同程度的增殖抑制作用,其中對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制較明顯,400μg/ml的RTP作用A549細(xì)胞72h的抑制率達(dá)66.57％。
　　 2.RTP各劑量組100μg/ml～800μg/ml濃度范圍內(nèi)作用于人肺癌A549細(xì)胞48h,能夠不同程度的誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡,對(duì)細(xì)胞周期的影響表現(xiàn)為G0/G1期阻滯。
　　 3.RTP在100μg/ml～800pg,ml濃度范圍內(nèi)作用于人肺癌A549

5、細(xì)胞48h,能夠增強(qiáng)A549細(xì)胞相關(guān)基因p53和Bax基因mRNA水平的表達(dá),降低Bcl-2基因的mRNA的表達(dá)水平,在濃度為400μg/ml時(shí),作用最強(qiáng)。
　　 4.RTP各劑量組(100mg/ml～400mg/ml)均能降低CCl4所致小鼠急性肝損傷肝體指數(shù)及血清ALT、AST活性,提高肝組織、腎組織、心組織勻漿T-AOC能力、SOD活力,降低MDA含量,同時(shí)不同程度減輕肝組織損傷的程度?？赡芘c其抗氧化作用有關(guān)。
　　

6、 5.RTP各劑量組(100mg/ml～400mg/ml)可提高肝組織、腎組織、心組織勻漿T-AOC能力、SOD活力,降低其MDA含量,對(duì)血清中NO、NOS含量沒影響,可提高D-gal衰老模型小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù),使衰老模型小鼠脾細(xì)胞細(xì)胞周期向S期和G2/M期發(fā)生轉(zhuǎn)換,促進(jìn)小鼠體內(nèi)細(xì)胞因子IL-2和TNF-α的分泌。
　　 [結(jié)論]
　　 1.貓爪草多糖可能通過直接抑制A549細(xì)胞和CNE-2Z細(xì)胞增殖,阻滯A549細(xì)