灰樹花深層發(fā)酵多糖、提取純化及抗氧化作用研究.pdf

1、灰樹花(Grifola frondosa)是擔(dān)子菌亞門、層菌綱、無隔擔(dān)子菌亞綱、非褶菌目、多孔菌屬中的一種大型藥食用真菌，其子實(shí)體富含氨基酸、多糖、微量元素等多種營養(yǎng)成份。灰樹花多糖有調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤、治療糖尿病、改善體內(nèi)脂肪代謝及抗氧化等多種生物學(xué)功效。目前對灰樹花深層發(fā)酵多糖的研究還比較少；本文研究了灰樹花液態(tài)發(fā)酵，優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基組成，并進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)；通過不同的提取方式提取灰樹花菌絲體多糖；灰樹花多糖純化、結(jié)構(gòu)信息的表征；多糖的

2、抗氧化作用的研究。研究結(jié)果如下：
　　 ⑴通過單因素試驗(yàn)確定了灰樹花液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源和氮源種類，篩選出對灰樹花多糖合成影響顯著的三個培養(yǎng)基組分為：葡萄糖，酵母粉和菜籽油。響應(yīng)面分析結(jié)果表明，在培養(yǎng)基組成為葡萄糖27.15g/L，酵母粉5.9g/L和菜籽油3.66g/L時，獲得最大菌絲體量4.93 g/L；而在培養(yǎng)基組成為葡萄糖25.85g/L，酵母粉5.56g/L和菜籽油3.34g/L時，最大胞外多糖量為1.89 g/L。在

3、優(yōu)化培養(yǎng)基組成的條件下5 L發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，擴(kuò)大培養(yǎng)后的菌絲體產(chǎn)量最大值達(dá)5.5g/L，胞外多糖量最大值2.1 g/L，大于優(yōu)化前菌絲體的產(chǎn)量。
　　 ⑵對灰樹花菌絲體多糖提取進(jìn)行了研究，探討了熱水、超聲及微波法提取灰樹花多糖的工藝。研究三種提取工藝的料水比、提取時間、提取溫度等因素對灰樹花菌絲體多糖提取率的影響。在單因素的基礎(chǔ)上，對熱水提取、超聲提取及微波提取法正交試驗(yàn)優(yōu)化。結(jié)果顯示熱水提取條件為料水比為1∶15，時間為4h，

4、溫度為95℃時，提取率達(dá)到最大為3.98％。超聲提取條件為料水比為1∶10，時間為45min，溫度為70℃時，提取率達(dá)到最大為4.36％。微波提取條件為料水比為1∶20，時間為12min，功率為600W時，提取率達(dá)到最大為4.74％。對比三種提取工藝可以看出采用微波提取灰樹花菌絲體多糖的提取率最高。
　　 ⑶通過水提、脫蛋白、透析、醇沉，DEAE-52及Sephadex G-75層析方法從灰樹花菌絲體中獲得多糖GFPⅠ-Ⅰ，以及

5、灰樹花深層發(fā)酵的胞外多糖組分WGFPⅠ-Ⅰ。經(jīng)GC分析灰樹花多糖GFPⅠ-Ⅰ、胞外多糖組分WGFPⅠ-Ⅰ以葡萄糖為主要單糖組分。紫外可見光譜、紅外光譜、氣相色譜及核磁對灰樹花多糖的一級結(jié)構(gòu)的基團(tuán)及它的一些結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的分析表明，多糖GFPⅠ-Ⅰ可能的結(jié)構(gòu)為[α-D-Glc(1→4)-]n型葡聚糖，平均分子量為7.3×104；多糖WGFPⅠ-Ⅰ可能的結(jié)構(gòu)為[α-D-Glc(1→4)-]n型葡聚糖，并且有[α-Glc(1→3)-]n支鏈結(jié)構(gòu)，平

6、均分子量為5.66×104。
　　 ⑷分別對灰樹花菌絲體多糖和胞外多糖體外、體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)，研究多糖的還原力、DPPH·體系中的抗氧化性、清除超氧陰離子和羥基自由基能力，以及體內(nèi)抗D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠衰老試驗(yàn)。結(jié)果表明灰樹花多糖隨著濃度的增大還原力增強(qiáng)；灰樹花菌絲體多糖濃度達(dá)到0.4mg/mL時其清除O2·-的能力達(dá)到80％，胞外多糖濃度達(dá)到0.4mg/mL時其清除O2·-的能力達(dá)到90％。灰樹花菌絲體、胞外多糖濃度為1.0mg/

7、mL時其抑制羥基自由基大小為70％。多糖對DPPH·的清除能力隨著多糖濃度的升高有增大的趨勢，特別是菌絲體多糖，當(dāng)濃度達(dá)到1.0mg/mL時，清除DPPH·的能力達(dá)到了67％。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，與模型組相比，灰樹花菌絲體多糖及胞外多糖可以顯著提高腦、肝、心臟組織和血清中T-AOC、GSH-Px、SOD活性(P＜0.05)，尤其以胞外多糖更為顯著；同時灰樹花多糖可以顯著降低肝臟、心臟組織和血清中MDA含量(P＜0.01)，對腦組織則沒有明