貓爪草多糖免疫調(diào)節(jié)及抗氧化作用研究.pdf

1、[目的]
　　 從小毛莨的塊根貓爪草中提取多糖,并研究貓爪草多糖(Polysaccharide ofRadix Ranunculi Temati,PRT)對正常小鼠和半貼壁巨噬細(xì)胞株ANA-1細(xì)胞免疫功能的影響,以及貓爪草多糖的抗氧化活性,探討其在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中應(yīng)用的可能性,為進(jìn)一步深入研究貓爪草多糖的抗炎、抗結(jié)核和抗腫瘤作用及其作用機理提供理論及實驗依據(jù)。
　　 [方法]
　　 采用水提醇沉法提取和分離貓爪草多

2、糖。紅外光譜法測定貓爪草多糖分子結(jié)構(gòu);運用MTT法和中性紅比色法檢測小鼠脾臟淋巴細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、腹腔巨噬細(xì)胞和ANA-1細(xì)胞增殖能力以及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能。不同濃度的貓爪草多糖作用于ANA-1細(xì)胞以及LPS誘導(dǎo)的ANA-1細(xì)胞,采用Griess法檢測NO生成量;一氧化氮合酶測定試劑盒檢測iNOS活性;RT-PCR法檢測iNOS、IL-6和TNF-α mRNA水平的表達(dá);采用普魯士蘭法、水楊酸捕捉法和改良的臨苯三酚自氧化法檢測貓爪草多糖

3、的還原能力、貓爪草多糖對.OH和O2·的清除能力。
　　 [結(jié)果]
　　 1.得到灰白色粉術(shù)狀貓爪草多糖,多糖含量為98.17％。紅外光譜顯示貓爪草多糖的糖苷鍵為α-構(gòu)型,具有吡喃型糖環(huán)。
　　 2.25μg/ml～400μg/ml貓爪草多糖能夠增強小鼠脾臟淋巴細(xì)胞、胸腺細(xì)胞和ANA-1細(xì)胞增殖能力以及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能,且呈劑量一效應(yīng)關(guān)系。
　　 3.25μg/ml～400μg/ml貓爪草多糖能夠增強

4、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞增殖能力,且200μg/ml貓爪草多糖對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的增殖作用最強。
　　 4.貓爪草多糖抑制ANA-1細(xì)胞以及LPS誘導(dǎo)的ANA-1細(xì)胞分泌NO和iNOS活性,隨著多糖濃度的增加,抑制能力逐漸增強。當(dāng)多糖濃度為100μg/ml時,能夠完全抑制iNOS在基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)。
　　 5.25μg/ml～400μg/ml貓爪草多糖能夠增強ANA-1細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-6和TNF-α mRNA水平的表達(dá),

5、在多糖濃度為200μg/ml時,作用最強。
　　 6.2mg/ml～10 mg/ml貓爪草多糖在不同濃度梯度或體積梯度具有一定的還原能力,2mg/ml～8 mg/ml貓爪草多糖具有較強的清除.OH的能力,在多糖濃度為8mg/ml時,接近同濃度抗壞血酸對.OH的清除作用。100μg/ml～800μg/ml貓爪草多糖具有較強的清除O2·的能力,在多糖濃度為800μg/ml時,清除率達(dá)到95.39%。
　　 [結(jié)論]