山羊胎盤肽的分離和初步鑒定及營養(yǎng)、免疫、抗氧化作用的研究.pdf

1、自1985年劉月新首次采用“勻漿－透析法”提取人胎盤肽以來，廣大科研工作者對胎盤肽進行了大量的理化分析與生物活性測定的研究，發(fā)現(xiàn)其在臨床用于治療病毒性肝炎、白細胞減少癥、重癥肌無力等免疫性疾病以及惡性腫瘤等，有較為理想的療效。山羊胎盤的結(jié)構(gòu)和功能與人的胎盤有許多相似之處，近幾年來已有報道，從羊的胎盤中也可以提取出羊胎盤肽，并且具有與人胎盤肽類似的生物學(xué)活性，但是目前對于羊胎盤肽生物活性的研究還不全面，胎盤肽中活性組分的具體研究更是非常缺

2、乏，而山羊胎盤來源有限，如用于臨床，規(guī)?；a(chǎn)胎盤肽需通過基因工程，活性組分的研究是基因工程的前提。本試驗通過超濾制得胎盤肽，通過層析和電泳對其進行了初步分離和鑒定，對胎盤肽粗提物從營養(yǎng)學(xué)方面進行了分析，對胎盤肽粗提物和各分離出的組分從免疫和抗氧化方面進行了研究，旨在揭示羊胎盤肽在營養(yǎng)、免疫和抗氧化方面的作用，以及為活性組分的進一步研究提供參考。本研究主要內(nèi)容如下：
　　 ⑴山羊胎盤肽的分離提純和初步鑒定。取冷凍的山羊胎盤子葉，

3、解凍后生理鹽水沖洗，然后剪碎，經(jīng)過反復(fù)凍融三次、高速組織勻漿機勻漿（12000r,3min，10次）、冷凍離心（4℃,8000r,20min）、取上清液微濾（0.22μm）、超濾(10KD)得到胎盤肽粗提物，粗提物為無色透明液體，為具有可透析可超濾性無熱原的小分子多肽，PH6.6-6.9。粗提物經(jīng)Superdex75層析得到四個組分，分別為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，冷凍干燥均為白色粉末，四組分經(jīng)加脲和甘油Tricine-SDS-PAGE電泳顯示分

4、子量分別為10.139KDa、8.166KDa、7.447KDa、6.761KDa。
　　 ⑵胎盤肽提取液的氨基酸分析和礦物元素測定。山羊胎盤肽提取液中，共檢出17種氨基酸，其中必需氨基酸7種，含量占總氨基酸的34.56％，對于兒童而言（兒童另需要精氨酸和組氨酸），含必需氨基酸9種，占總含量的42.59％，含有Fe、Zn、Cu等微量元素，重金屬種類很少且含量非常低，不存在臨床使用中重金屬中毒的威脅。由此可見，山羊胎盤肽提取液具有

5、極高的營養(yǎng)價值，是安全理想的氨基酸補充營養(yǎng)品。
　　 ⑶山羊胎盤肽對小鼠免疫功能的影響。將小鼠隨機分成6組，其中5組為試驗組（分別腹腔注射組分：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、和粗提物）；每個試驗組又分為高中低三種劑量小組（分別為18mg/kg、9mg/kg、4.5mg/kg）,每小組10只；對照組10只，僅注射生理鹽水。每天注射一次，連續(xù)注射一周。通過對各組分試驗組小鼠外周血血清中IL-2含量同對照組相比可見，各組分均具有提高小鼠血液中IL-

6、2含量的作用，其中組分Ⅲ、Ⅳ及粗提物試驗組IL-2含量比對照組提高了15.3％～30.1％，差異達到顯著（p＜0.05），組分Ⅳ的活性較強，但與組分Ⅲ和粗提物相比差異并不顯著（p＞0.05）。通過對各組分試驗組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能同對照組相比可見，組分Ⅲ、Ⅳ及粗提物有促進小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的作用，同對照組相比，差異極顯著（p＜0.01）。本實驗結(jié)果提示組分Ⅲ、Ⅳ及粗提物可顯著提高小白鼠的免疫功能，在胎盤小肽這類混合小肽中有免

7、疫活性的主要成分是組分Ⅲ、Ⅳ。
　　 ⑷山羊胎盤肽對小鼠抗氧化能力的影響。通過對各組分試驗組小鼠SOD、MDA含量及SOD/MDA值同對照組相比顯示，中高劑量的胎盤肽Ⅳ和粗提物能顯著提高小鼠血清SOD含量（P<0.05），顯著降低MDA含量(P<0.05)，顯著提高SOD/MDA值（P<0.05），提高小鼠的抗氧化能力，高劑量組比中劑量組更明顯，但沒有出現(xiàn)差異極顯著的情況（P>0.01），說明山羊胎盤肽和粗提物提高小鼠的抗氧化能