山羊胎盤肽的分離和初步鑒定及營(yíng)養(yǎng)、免疫、抗氧化作用的研究.pdf

1、自1985年劉月新首次采用“勻漿－透析法”提取人胎盤肽以來(lái)，廣大科研工作者對(duì)胎盤肽進(jìn)行了大量的理化分析與生物活性測(cè)定的研究，發(fā)現(xiàn)其在臨床用于治療病毒性肝炎、白細(xì)胞減少癥、重癥肌無(wú)力等免疫性疾病以及惡性腫瘤等，有較為理想的療效。山羊胎盤的結(jié)構(gòu)和功能與人的胎盤有許多相似之處，近幾年來(lái)已有報(bào)道，從羊的胎盤中也可以提取出羊胎盤肽，并且具有與人胎盤肽類似的生物學(xué)活性，但是目前對(duì)于羊胎盤肽生物活性的研究還不全面，胎盤肽中活性組分的具體研究更是非常缺

2、乏，而山羊胎盤來(lái)源有限，如用于臨床，規(guī)?；a(chǎn)胎盤肽需通過(guò)基因工程，活性組分的研究是基因工程的前提。本試驗(yàn)通過(guò)超濾制得胎盤肽，通過(guò)層析和電泳對(duì)其進(jìn)行了初步分離和鑒定，對(duì)胎盤肽粗提物從營(yíng)養(yǎng)學(xué)方面進(jìn)行了分析，對(duì)胎盤肽粗提物和各分離出的組分從免疫和抗氧化方面進(jìn)行了研究，旨在揭示羊胎盤肽在營(yíng)養(yǎng)、免疫和抗氧化方面的作用，以及為活性組分的進(jìn)一步研究提供參考。本研究主要內(nèi)容如下：
　　 ⑴山羊胎盤肽的分離提純和初步鑒定。取冷凍的山羊胎盤子葉，

3、解凍后生理鹽水沖洗，然后剪碎，經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融三次、高速組織勻漿機(jī)勻漿（12000r,3min，10次）、冷凍離心（4℃,8000r,20min）、取上清液微濾（0.22μm）、超濾(10KD)得到胎盤肽粗提物，粗提物為無(wú)色透明液體，為具有可透析可超濾性無(wú)熱原的小分子多肽，PH6.6-6.9。粗提物經(jīng)Superdex75層析得到四個(gè)組分，分別為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，冷凍干燥均為白色粉末，四組分經(jīng)加脲和甘油Tricine-SDS-PAGE電泳顯示分

4、子量分別為10.139KDa、8.166KDa、7.447KDa、6.761KDa。
　　 ⑵胎盤肽提取液的氨基酸分析和礦物元素測(cè)定。山羊胎盤肽提取液中，共檢出17種氨基酸，其中必需氨基酸7種，含量占總氨基酸的34.56％，對(duì)于兒童而言（兒童另需要精氨酸和組氨酸），含必需氨基酸9種，占總含量的42.59％，含有Fe、Zn、Cu等微量元素，重金屬種類很少且含量非常低，不存在臨床使用中重金屬中毒的威脅。由此可見，山羊胎盤肽提取液具有

5、極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，是安全理想的氨基酸補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)品。
　　 ⑶山羊胎盤肽對(duì)小鼠免疫功能的影響。將小鼠隨機(jī)分成6組，其中5組為試驗(yàn)組（分別腹腔注射組分：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、和粗提物）；每個(gè)試驗(yàn)組又分為高中低三種劑量小組（分別為18mg/kg、9mg/kg、4.5mg/kg）,每小組10只；對(duì)照組10只，僅注射生理鹽水。每天注射一次，連續(xù)注射一周。通過(guò)對(duì)各組分試驗(yàn)組小鼠外周血血清中IL-2含量同對(duì)照組相比可見，各組分均具有提高小鼠血液中IL-

6、2含量的作用，其中組分Ⅲ、Ⅳ及粗提物試驗(yàn)組IL-2含量比對(duì)照組提高了15.3％～30.1％，差異達(dá)到顯著（p＜0.05），組分Ⅳ的活性較強(qiáng)，但與組分Ⅲ和粗提物相比差異并不顯著（p＞0.05）。通過(guò)對(duì)各組分試驗(yàn)組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能同對(duì)照組相比可見，組分Ⅲ、Ⅳ及粗提物有促進(jìn)小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的作用，同對(duì)照組相比，差異極顯著（p＜0.01）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示組分Ⅲ、Ⅳ及粗提物可顯著提高小白鼠的免疫功能，在胎盤小肽這類混合小肽中有免

7、疫活性的主要成分是組分Ⅲ、Ⅳ。
　　 ⑷山羊胎盤肽對(duì)小鼠抗氧化能力的影響。通過(guò)對(duì)各組分試驗(yàn)組小鼠SOD、MDA含量及SOD/MDA值同對(duì)照組相比顯示，中高劑量的胎盤肽Ⅳ和粗提物能顯著提高小鼠血清SOD含量（P<0.05），顯著降低MDA含量(P<0.05)，顯著提高SOD/MDA值（P<0.05），提高小鼠的抗氧化能力，高劑量組比中劑量組更明顯，但沒有出現(xiàn)差異極顯著的情況（P>0.01），說(shuō)明山羊胎盤肽和粗提物提高小鼠的抗氧化能