BCA3調(diào)控巨噬細胞功能的研究.pdf

1、背景:乳腺癌相關基因BCA3(breast cancer-associated gene)是2003年發(fā)現(xiàn)在乳腺癌和前列腺癌細胞中高表達的一個新基因。BCA3蛋白富含脯氨酸,具有多個蛋白結合位點和磷酸化位點。BCA3可以通過與RING1競爭結合KyoT2,拮抗RING1對RBP-J轉錄活性的抑制,進而調(diào)控Notch信號通路。BCA3也可以與PKA相互作用,故而被稱為PKA相互作用蛋白(PKA-interacting protein,AK

2、IP1);BCA3與PKA催化亞基結合,通過影響p65磷酸化調(diào)節(jié)NFκB的轉錄活性。BCA3參與這些重要信號通路的調(diào)控,提示它可能在多種細胞生物學活性中發(fā)揮一定的調(diào)節(jié)作用。研究提示,BCA3可以通過與TAp73相互作用,借助線粒體途徑促進放療引起的宮頸癌細胞凋亡,增加宮頸癌細胞對放療的敏感性。BCA3與Rac1相互作用能顯著減弱CSF-1誘導的破骨細胞的遷移能力。破骨細胞是一類分布在骨組織中的巨噬細胞,這提示BCA3可能參與調(diào)節(jié)巨噬細胞

3、的功能。巨噬細胞是機體的重要免疫細胞,大量研究表明巨噬細胞功能異常與自身免疫病、腫瘤等多種疾病密切相關。因此,探討腫瘤相關基因BCA3在巨噬細胞以及免疫系統(tǒng)中的生物學功能對進一步闡述免疫應答機制以及多種疾病的治療有重要指導意義。
　　目的:探討B(tài)CA3對巨噬細胞功能的調(diào)控及其機制。
　　方法:通過Western blot的方法檢測BCA3在多種免疫細胞和免疫組織中的表達;體外誘導小鼠骨髓細胞為巨噬細胞,Western blo

4、t的方法檢測在巨噬細胞分化過程中BCA3蛋白表達量的變化;以RAW264.7和U937為細胞模型,借助慢病毒感染的方法敲低BCA3的表達,分析細胞生物學功能改變,主要關注對炎癥刺激的反應性,包括吞噬功能、分泌細胞因子、細胞表面分子等的變化;利用LPS注射小鼠腹腔構建炎癥動物模型,探索炎癥條件下,巨噬細胞功能與BCA3的關系。通過Western blot等方法探討巨噬細胞中BCA3對NFκB轉錄活性的影響,初步分析BCA3參與調(diào)控巨噬細胞

5、功能的潛在機制;借助基因芯片技術,分析BCA3基因參與生物學活性的信號通路網(wǎng)絡。
　　結果:BCA3在多種免疫相關細胞系和免疫組織中高表達;隨著巨噬細胞逐步分化成熟, BCA3蛋白表達量顯著上調(diào)。在RAW264.7和U937細胞模型中,敲低BCA3顯著增強LPS等介導的炎癥反應:吞噬功能增強;分泌炎性因子IL-6、TNFα增加;表達IL-8、IL-12、IL-10 mRNA上調(diào);特異性的細胞表面標志分子CD14、CD11b、CD8

6、6等表達增強。WB結果提示,敲低BCA3后,p65組成性表達上調(diào),在LPS等炎性因子刺激下, p65磷酸化增強。小鼠炎癥模型實驗結果提示:在炎癥初期,巨噬細胞中BCA3表達顯著下調(diào)。基因芯片數(shù)據(jù)分析顯示BCA3下調(diào)可以影響Toll樣受體、PPAR等信號通路;引起細胞遷移、抗原呈遞、細胞黏附等生物學活性相關分子的表達譜改變。
　　結論:BCA3蛋白高表達于各類免疫細胞中,并且可以通過影響NFκB信號通路,參與調(diào)控巨噬細胞介導的炎性反