腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促瘤功能.pdf

1、目的：研究與腫瘤細(xì)胞相互作用的巨噬細(xì)胞腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞（巨噬細(xì)胞）的功能轉(zhuǎn)變，與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后，巨噬細(xì)胞由對腫瘤的殺傷作用轉(zhuǎn)變?yōu)閷δ[瘤細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。并且進(jìn)一步研究使巨噬細(xì)胞產(chǎn)生此種變化的誘因以及相關(guān)的分子機制。
　　 方法：⑴將腫瘤細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)一段時間（72小時），此為巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞初次共培養(yǎng)，將此與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞再次共培養(yǎng)，對照組為腫瘤細(xì)胞單獨培養(yǎng)組以及新鮮分離的巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)

2、胞共培養(yǎng)組，運用細(xì)胞計數(shù)學(xué)方法和流式細(xì)胞術(shù)方法檢測經(jīng)過與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞（以下稱為“與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞”）對腫瘤細(xì)胞增殖的影響。⑵巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞兩室共培養(yǎng),觀察在巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞不接觸時與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞是否具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的能力。⑶用這種與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞混合后，接種入小鼠腿部肌肉，對照組為腫瘤細(xì)胞單獨接種小鼠肌腿部肉以及新鮮分離巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞混合接種小鼠腿部肌肉，觀察實

3、驗組與對照組之間在腫瘤形成中作用的不同。⑷將這種與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞接種到腫瘤小鼠腫瘤內(nèi)部，對照組為腫瘤內(nèi)部接種新鮮分離的巨噬細(xì)胞，觀察實驗組與對照組腫瘤生長的差別。⑸采用細(xì)胞培養(yǎng)方法，在培養(yǎng)過程中加入腫瘤細(xì)胞凍融上清，模擬腫瘤微環(huán)境，流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)腫瘤凍融上清刺激的巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞增殖的影響以及巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志的變化。⑹在巨噬細(xì)胞生長的不同階段加入腫瘤細(xì)胞凍融上清處理，RT-PCR檢測處理后巨噬細(xì)胞基因表達(dá)的變化。

4、　　 結(jié)果：①結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)時，與空白培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞和新鮮分離巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)組相比，與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞可明顯促進(jìn)H22腫瘤細(xì)胞的增長。并且這種情況在將巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞兩室培養(yǎng)時同樣成立。②體內(nèi)試驗中，與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞混合后接種小鼠，小鼠腫瘤生長速度比單純接種腫瘤細(xì)胞以及新鮮分離巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞混合接種組小鼠快。③在同樣大小的瘤中，瘤內(nèi)接種與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞亦可以促進(jìn)腫瘤的生長

5、。④流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示，加入腫瘤細(xì)胞凍融上清培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖能力。⑤腹腔分離巨噬細(xì)胞在體外培養(yǎng)時其表面標(biāo)志Gr1，CD11b，F(xiàn)4/80的表達(dá)發(fā)生變化。⑥加入腫瘤細(xì)胞凍融上清培養(yǎng)后的巨噬細(xì)胞VEGF和PDGF表達(dá)量增高。
　　 結(jié)論：免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞在體內(nèi)微環(huán)境中與腫瘤細(xì)胞相互作用后，其功能發(fā)生改變，變成一種腫瘤生長的促進(jìn)因子，幫助腫瘤細(xì)胞在機體中免疫逃逸。這種變化時由于腫瘤細(xì)胞與巨噬細(xì)胞相互作用的過程腫