膠質(zhì)瘤干祖細胞誘導宿主腹腔巨噬細胞惡性轉(zhuǎn)化及機制的研究.pdf

1、第一部分：膠質(zhì)瘤干祖細胞與小鼠巨噬細胞共培養(yǎng)產(chǎn)生的融合細胞可轉(zhuǎn)化成惡性巨噬細胞
　　目的：我們曾推測膠質(zhì)瘤間質(zhì)中的巨噬細胞（macrophage，MP）惡性轉(zhuǎn)化是通過膠質(zhì)瘤干祖細胞（Glioma Stem Progenitor cells，GSPCs）與MP融合導致的。本文旨在通過GSPCs與MP共培養(yǎng)來驗證這種推測是否正確。
　　方法；將轉(zhuǎn)有紅色熒光蛋白基因(RFP)的GSPCs(SU3)與表達增強型綠色熒光蛋白(EGFP

2、)的小鼠腹腔沖洗出的MP進行體外共培養(yǎng)；用單克隆方法建立表達RFP+/GFP+雙色熒光（黃色）的細胞系，然后進行癌細胞相關表型分析、致瘤性試驗、鼠巨噬細胞標記物檢測。
　　結果：（1）這兩種細胞共培養(yǎng)后，細胞群中出現(xiàn)為數(shù)不多的黃色細胞，并成功單克隆到C3,C4和C12三株細胞。（2）C12繼續(xù)傳代培養(yǎng)后分化出RFP+、EGFP+和RFP+/EGFP+三種類型細胞，但隨著傳代次數(shù)增多，EGFP+（綠色）細胞比例逐漸升高而成為主體，R

3、FP+/EGFP+（黃色）細胞比例逐漸下降并維持在較低水平，而RFP+（紅色）細胞基本消失。（3）C12細胞株中的EGFP+細胞具有：①生長接觸抑制消失，增殖速度快，染色體異倍體等癌細胞特征；②在裸小鼠體內(nèi)具有高致瘤率(5/5)；③表達巨噬細胞特異性標記CD68，大部分染色體為鼠端著絲粒。
　　結論：體外模型證明我們之前在實體瘤中觀察到的人腦膠質(zhì)瘤干祖細胞誘導宿主巨噬細胞惡性轉(zhuǎn)化可通過細胞融合途徑實現(xiàn)。與我們先前從荷瘤鼠實體瘤組織

4、中克隆到惡性轉(zhuǎn)化的巨噬細胞株(ihCTC)的體內(nèi)實驗一起，相互印證了腫瘤微環(huán)境中宿主巨噬細胞惡性轉(zhuǎn)化是客觀存在的。宿主細胞與腫瘤干祖細胞融合后發(fā)生的惡變既為腫瘤惡性進展和腫瘤異質(zhì)性增添了新的內(nèi)涵；又為腫瘤靶向治療增加了新的靶標。
　　第二部分：膠質(zhì)瘤干祖細胞與巨噬細胞共培養(yǎng)時的社會活動:細胞連接、融合及胞釋事件的縮時攝影觀察
　　目的：已有用細胞社會學去理解實時監(jiān)測到的單個免疫細胞分泌的因子在免疫疾病中所起作用的報告，通過分

5、析免疫細胞社會中的腫瘤細胞與宿主巨噬細胞之間的關系，旨在探尋腫瘤細胞社會中打破免疫平衡的大事件。
　　方法：釆用紅綠雙色熒光示蹤膠質(zhì)瘤干/祖細胞與宿主巨噬細胞共培養(yǎng)，單克隆其中的黃色細胞，體外擴増培養(yǎng)后于活細胞工作站實時攝影縮時成像并視頻分析目標細胞的社會行為。
　　結果相關細胞實時動態(tài)連續(xù)觀察發(fā)現(xiàn)：①細胞間傳遞信息的連接管道的6種類型。②兩個活躍細胞相互作用后變成一個細胞，即細胞融合；已融合的細胞與另一個細胞再融合。③融合