腫瘤相關巨噬細胞與淋巴瘤細胞相互作用及雷利度胺作用機制研究.pdf

1、研究背景:
　　腫瘤相關巨噬細胞(Tumor-associated Macrophage，TAM)是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，其具有極強的可塑性和異質性，在腫瘤的發(fā)生、進展、轉移等過程中起到重要作用。近年來大量研究發(fā)現(xiàn)，TAM的大量浸潤與多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤的不良預后相關。對于腫瘤微環(huán)境中TAM的形成機制、表型轉換及其對腫瘤生長作用的探索，將為今后針對TAM的免疫治療和靶向治療供理論依據(jù)和支持。
　　研究目的:
　　1

2、、探索體外條件下，淋巴瘤細胞對于外周血來源的單核細胞向TAM分化的影響及TAM對淋巴瘤細胞生長的作用。對比患者及健康志愿者在以上方面有無差別。
　　2、研究雷利度胺在腫瘤微環(huán)境中對于單核細胞向TAM分化的影響及其在腫瘤微環(huán)境中的作用。對比以上作用在患者及健康志愿者有無差別。
　　研究方法:
　　本研究共納入19名初治淋巴瘤患者及8名健康志愿者。在體外條件下，利用Transwell嵌套構建外周血單核細胞與淋巴瘤細胞株HU

3、T-78的共培養(yǎng)模型。通過流式細胞技術分析TAM特征性表型CD68、CD163的表達情況來研究淋巴瘤細胞對于單核細胞向TAM分化的作用。同時，從淋巴瘤細胞的生長曲線、細胞因子IL-10、VEGF的分泌、信號轉導和轉錄活化因子3(STAT3)表達激活幾個方面進一步研究分化而來的TAM對于腫瘤細胞及共培養(yǎng)體系的影響。對比初治淋巴瘤患者和健康志愿者在以上幾方面有無差別。
　　構建PBMC與淋巴瘤細胞共培養(yǎng)模型以模擬腫瘤微環(huán)境，采用同上的

4、研究方法探索雷利度胺在此共培養(yǎng)體系中對于單核細胞向TAM分化的影響，對比患者和健康志愿者有無差別。
　　研究結果:
　　1、患者及健康志愿者的單核細胞與淋巴瘤細胞共培養(yǎng)后CD68、CD163、CD68&CD163(+)細胞的比例顯著升高，患者及健康志愿者升高程度無顯著差異。
　　2、患者及健康志愿者的單核細胞及其分化而來的巨噬細胞在體外培養(yǎng)條件下對淋巴瘤細胞的生長無直接的促進或抑制作用。
　　3、患者共培養(yǎng)組IL

5、-10、VEGF水平明顯低于單核細胞和淋巴瘤細胞單獨培養(yǎng)組之和(P＜0.01)，健康志愿者無此現(xiàn)象。
　　4、患者共培養(yǎng)組淋巴瘤細胞相對于單獨培養(yǎng)組其STAT3基因的表達量略有下降趨勢，但無統(tǒng)計學差異。對比患者與健康志愿者共培養(yǎng)組STAT3基因的相對表達量，健康志愿者組明顯高于患者組(P＜0.05)。
　　5、對于患者組，在PBMC與HUT-78構成的共培養(yǎng)體系中加入雷利度胺后CD68、CD163、CD68&CD163(+)

6、細胞比例及CD68&CD163(+)在CD68(+)細胞中所占比例均有極其顯著的下降(P＜0.01)。而對于健康志愿者組，CD68、CD163、CD68&CD163(+)細胞比例均有顯著下降(P＜0.05)，而CD68&CD163(+)在CD68(+)中所占比例無顯著下降(p=0.114)。
　　6、在患者組，加入雷利度胺的共培養(yǎng)組相對于未加雷利度胺的共培養(yǎng)組IL-10、VEGF濃度均有顯著下降(IL-10P=0.003，VEGF

7、P=0.018)，TGF-β1均值略有下降趨勢，但無統(tǒng)計學意義。在健康志愿者組，加入雷利度胺的共培養(yǎng)組相對于未加雷利度胺的共培養(yǎng)組IL-10濃度有顯著下降(P＜0.05)，但程度弱于患者，VEGF、TGF-β1無顯著下降趨勢。
　　7、患者組共培養(yǎng)體系加入雷利度胺后淋巴瘤細胞STAT3基因的表達量有下降趨勢，但無顯著統(tǒng)計學意義。而健康對照組加入雷利度胺對于共培養(yǎng)體系中淋巴瘤細胞STAT3基因的表達無促進或抑制趨勢。
　　研究

8、結論:
　　1、體外條件下，淋巴瘤細胞能夠促進外周血單核細胞向M2型巨噬細胞分化。在淋巴瘤細胞對分化的促進程度上，患者及健康志愿者無顯著差異。
　　2、患者單核細胞轉化而來的TAM在體外共培養(yǎng)體系中的整體作用類似M1型巨噬細胞，能夠有效抑制共培養(yǎng)體系中總IL-10、VEGF的分泌，對淋巴瘤細胞STAT3的表達無明顯激活。而健康對照組的TAM對體系中IL-10及VEGF的分泌無明顯影響，與其共培養(yǎng)的淋巴瘤細胞STAT3的表達明

9、顯高于患者組。
　　3、對于患者，雷利度胺在PBMC與淋巴瘤細胞構建的體外共培養(yǎng)體系中能夠有效抑制單核細胞向M2型巨噬細胞的分化。而對于健康志愿者，雷利度胺僅能夠抑制單核細胞向巨噬細胞總體的分化，但并不能顯著降低其分化為M2型巨噬細胞的比例。
　　4、對于患者，雷利度胺對共培養(yǎng)體系中IL-10、VEGF、TGF-β1的分泌及淋巴瘤細胞STAT3基因的表達均呈現(xiàn)一定程度的抑制作用。而對于健康志愿者，無以上抑制作用或作用程度明顯