腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與淋巴瘤細(xì)胞相互作用及雷利度胺作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(Tumor-associated Macrophage，TAM)是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，其具有極強(qiáng)的可塑性和異質(zhì)性，在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移等過(guò)程中起到重要作用。近年來(lái)大量研究發(fā)現(xiàn)，TAM的大量浸潤(rùn)與多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)。對(duì)于腫瘤微環(huán)境中TAM的形成機(jī)制、表型轉(zhuǎn)換及其對(duì)腫瘤生長(zhǎng)作用的探索，將為今后針對(duì)TAM的免疫治療和靶向治療供理論依據(jù)和支持。
　　研究目的:
　　1

2、、探索體外條件下，淋巴瘤細(xì)胞對(duì)于外周血來(lái)源的單核細(xì)胞向TAM分化的影響及TAM對(duì)淋巴瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。對(duì)比患者及健康志愿者在以上方面有無(wú)差別。
　　2、研究雷利度胺在腫瘤微環(huán)境中對(duì)于單核細(xì)胞向TAM分化的影響及其在腫瘤微環(huán)境中的作用。對(duì)比以上作用在患者及健康志愿者有無(wú)差別。
　　研究方法:
　　本研究共納入19名初治淋巴瘤患者及8名健康志愿者。在體外條件下，利用Transwell嵌套構(gòu)建外周血單核細(xì)胞與淋巴瘤細(xì)胞株HU

3、T-78的共培養(yǎng)模型。通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)分析TAM特征性表型CD68、CD163的表達(dá)情況來(lái)研究淋巴瘤細(xì)胞對(duì)于單核細(xì)胞向TAM分化的作用。同時(shí)，從淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞因子IL-10、VEGF的分泌、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)表達(dá)激活幾個(gè)方面進(jìn)一步研究分化而來(lái)的TAM對(duì)于腫瘤細(xì)胞及共培養(yǎng)體系的影響。對(duì)比初治淋巴瘤患者和健康志愿者在以上幾方面有無(wú)差別。
　　構(gòu)建PBMC與淋巴瘤細(xì)胞共培養(yǎng)模型以模擬腫瘤微環(huán)境，采用同上的

4、研究方法探索雷利度胺在此共培養(yǎng)體系中對(duì)于單核細(xì)胞向TAM分化的影響，對(duì)比患者和健康志愿者有無(wú)差別。
　　研究結(jié)果:
　　1、患者及健康志愿者的單核細(xì)胞與淋巴瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后CD68、CD163、CD68&CD163(+)細(xì)胞的比例顯著升高，患者及健康志愿者升高程度無(wú)顯著差異。
　　2、患者及健康志愿者的單核細(xì)胞及其分化而來(lái)的巨噬細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)直接的促進(jìn)或抑制作用。
　　3、患者共培養(yǎng)組IL

5、-10、VEGF水平明顯低于單核細(xì)胞和淋巴瘤細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組之和(P＜0.01)，健康志愿者無(wú)此現(xiàn)象。
　　4、患者共培養(yǎng)組淋巴瘤細(xì)胞相對(duì)于單獨(dú)培養(yǎng)組其STAT3基因的表達(dá)量略有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對(duì)比患者與健康志愿者共培養(yǎng)組STAT3基因的相對(duì)表達(dá)量，健康志愿者組明顯高于患者組(P＜0.05)。
　　5、對(duì)于患者組，在PBMC與HUT-78構(gòu)成的共培養(yǎng)體系中加入雷利度胺后CD68、CD163、CD68&CD163(+)

6、細(xì)胞比例及CD68&CD163(+)在CD68(+)細(xì)胞中所占比例均有極其顯著的下降(P＜0.01)。而對(duì)于健康志愿者組，CD68、CD163、CD68&CD163(+)細(xì)胞比例均有顯著下降(P＜0.05)，而CD68&CD163(+)在CD68(+)中所占比例無(wú)顯著下降(p=0.114)。
　　6、在患者組，加入雷利度胺的共培養(yǎng)組相對(duì)于未加雷利度胺的共培養(yǎng)組IL-10、VEGF濃度均有顯著下降(IL-10P=0.003，VEGF

7、P=0.018)，TGF-β1均值略有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在健康志愿者組，加入雷利度胺的共培養(yǎng)組相對(duì)于未加雷利度胺的共培養(yǎng)組IL-10濃度有顯著下降(P＜0.05)，但程度弱于患者，VEGF、TGF-β1無(wú)顯著下降趨勢(shì)。
　　7、患者組共培養(yǎng)體系加入雷利度胺后淋巴瘤細(xì)胞STAT3基因的表達(dá)量有下降趨勢(shì)，但無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而健康對(duì)照組加入雷利度胺對(duì)于共培養(yǎng)體系中淋巴瘤細(xì)胞STAT3基因的表達(dá)無(wú)促進(jìn)或抑制趨勢(shì)。
　　研究

8、結(jié)論:
　　1、體外條件下，淋巴瘤細(xì)胞能夠促進(jìn)外周血單核細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞分化。在淋巴瘤細(xì)胞對(duì)分化的促進(jìn)程度上，患者及健康志愿者無(wú)顯著差異。
　　2、患者單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái)的TAM在體外共培養(yǎng)體系中的整體作用類似M1型巨噬細(xì)胞，能夠有效抑制共培養(yǎng)體系中總IL-10、VEGF的分泌，對(duì)淋巴瘤細(xì)胞STAT3的表達(dá)無(wú)明顯激活。而健康對(duì)照組的TAM對(duì)體系中IL-10及VEGF的分泌無(wú)明顯影響，與其共培養(yǎng)的淋巴瘤細(xì)胞STAT3的表達(dá)明

9、顯高于患者組。
　　3、對(duì)于患者，雷利度胺在PBMC與淋巴瘤細(xì)胞構(gòu)建的體外共培養(yǎng)體系中能夠有效抑制單核細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞的分化。而對(duì)于健康志愿者，雷利度胺僅能夠抑制單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞總體的分化，但并不能顯著降低其分化為M2型巨噬細(xì)胞的比例。
　　4、對(duì)于患者，雷利度胺對(duì)共培養(yǎng)體系中IL-10、VEGF、TGF-β1的分泌及淋巴瘤細(xì)胞STAT3基因的表達(dá)均呈現(xiàn)一定程度的抑制作用。而對(duì)于健康志愿者，無(wú)以上抑制作用或作用程度明顯